“The Empress Sisi” Sketch For A Painting, Рисунок — Rok Blenkuš

© 2020 Rok Blenkuš

Дополнительные снимки

Дайте нам знать, если вы хотели бы видеть больше фотографий этого произведения искусства!

• Обратная сторона работы / Сторона работы
• Подробности / Подпись / Поверхность или текстура произведения искусства
• Работа в ситуации, Другой…

Дополнительные снимки

Дайте нам знать, если вы хотели бы видеть больше фотографий этого произведения искусства!

• Обратная сторона работы / Сторона работы
• Подробности / Подпись / Поверхность или текстура произведения искусства
• Работа в ситуации, Другой…

Пастель на Бумага, 50×35 cm

279 €

Цена:

Бесплатная доставка

Trustpilot
Отлично

Стандартный комплект поставки

| Предпочитаете экспресс?

Отправлено из: Словения

Гарантируем возврат денежных средств в течение 14 дней

Доставка по всему миру

Гарантия безопасности сделки на 100%

Бесплатный возврат

• Доставка
• Гарантия
• Оплата
• Возвращает

Отправлено продавцом:
Отправкой этого произведения искусства занимается непосредственно продавец.

Подробнее

• упаковка Все работы доставляются премиальным перевозчиком, надёжно охраняемым и застрахованным.
• Отслеживание Отследить заказ до доставки покупателю. Вам будет предоставлен номер отслеживания, чтобы Вы могли следить за посылкой в ​​режиме реального времени.
• Задержка
  Большинство посылок доставляются по всему миру в течение 1-3 недель.
  (Оценить)

Artmajeur прилагает все усилия, чтобы гарантировать вам приобретение подлинных оригинальных работ по самой справедливой цене или возместить вам полную стоимость.

Подробнее

• Отслеживаемый онлайн сертификат подлинности
  Сертификаты подлинности можно проверить онлайн в любое время, отсканировав код произведения искусства.
• Сертификация художественного рейтинга Эксперты изучают работу и карьеру художника, а затем создают независимое и достоверное среднее значение цены. Среднее значение цены помещает художника на определённое место в ценовом диапазоне за данный период. Экспертов также можно попросить дать более точную оценку для конкретного произведения.

Гарантия безопасности сделки на 100%, Приемлемые способы оплаты: Кредитная карта, PayPal, Банковский перевод.

Подробнее

Безопасная прямая покупка
Сделка гарантируется Artmajeur: продавец получит деньги только после того, как покупатель получит произведение искусства.
100% гарантия безопасности платежей, в соответствии с сертификатом SSL + 3D Secure.

Бесплатный возврат: Гарантируем возврат денежных средств в течение 14 дней.

Подробнее

Возврат принимается 14 дней
Artmajeur на 100% стремится удовлетворить коллекционеров: у вас есть 14 дней, чтобы вернуть оригинальную работу. Работа должна быть возвращена художнику в идеальном состоянии, в оригинальной упаковке. Все подходящие предметы могут быть возвращены (если не указано иное).

Купить репродукцию

Эта печать доступна в нескольких размерах.

Художественные печати

35,70 €

Печать на холсте

57,12 €

Тиснение по металлу

116,62 €

Настроить

Качество музея

Trustpilot
Отлично

Художникам выплачивается роялти за каждую продажу

Цифровое лицензирование

Это изображение можно скачать с лицензией

Веб-лицензия

47,60 €

Лицензия для СМИ

166,60 €

Коммерческая лицензия

416,50 €

Настроить & Скачать

Максимальное разрешение: 2625 x 3704 px

Скачать сразу после покупки

Художникам выплачивается роялти за каждую продажу

уникальный экземпляр

Работа за подписью художника

Сертификат подлинности включен

Это художественное произведение появляется в 5 в коллекциях

• Подлинное произведение искусства (One Of A Kind)

  Рисунок,

  Пастель

  на Бумага

  уникальный экземпляр (OOAK / Подлинное произведение искусства)

  Уникальные произведения искусства также известны как произведения искусства «OOAK». Это значит, что каждое произведение искусства уникально и не будет никогда ни одного идентичного.

• Размеры

  Высота 50cm, Ширина 35cm

• Рама
  Эта работа не оформлена
• Категории

  Рисунки до 500 €

  Изобразительное искусство

The young Empress of AustroHungarian empire. Shy, but proud.
По поводу данного произведения: Классификация, методы & Стили Пастель Рисунок выполнен цветной палочкой. Он состоит из пигментов, шихты и связующего[…]

The young Empress of AustroHungarian empire. Shy, but proud.

Связанные темы

SisiViennaEmpire

Переведено автоматически

Изобразительное искусство

sisi

vienna

empire

Подписаться

Rok Blenkuš

Словения

Смотреть ещё Rok Blenkuš

Просмотреть все произведения

Акрил

| 130×90 cm

3 421 €

Пастель на Бумага

| 42×29 cm

Пастель на Бумага

| 29×42 cm

Акрил на Льняной холст

| 120×90 cm

8 079 €

Доступные печатные версии

Похожие произведения

Показать больше таких работ

Колготки женские SiSi Miss, 15den, размер 2(S), Naturelle, натуральный

Колготки женские SiSi Miss, 15den, размер 2(S), Naturelle, натуральный — купить в Баку. Цена, обзор, отзывы, продажа

• Главная
• Категории товаров
• Аксессуары, часы, украшения
• Женские аксессуары
• Колготки, чулки, носки
• Колготки и чулки

ОбзорХарактеристикиОписаниеРейтинг и отзывы о товаре Цены всех продавцов (4)ГарантияВозврат

Характеристики

Рейтинг и отзывы о товаре

Нет оценок0

Об этом товаре еще нет ни одного отзыва, будьте первым, кто поделиться своим впечатлением!

Смотрите также

4. 50 ₼Колготки женские Conte Solo 20 den Nero 6Продавец:Bantik.az, Kapriz Cosmetics

4.50 ₼Колготки женские Conte Solo 20 den Mocca 6Продавец:Bantik.az

4.50 ₼Колготки женские Conte Solo 20 den Bronz 6Продавец:Bantik.az, Kapriz Cosmetics

10 ₼Чулки женские Conte Class 20 den Natural 3-4Продавец:Alix Avien shop

10 ₼Чулки женские Conte Class 20 den Natural 1-2Продавец:Alix Avien shop

14.50 ₼Чулки Gabriella Erotica Calze Lux 644, 15den, размер 3(M)/4(L), черныйПродавец:Bantik.az, Rose Store

14.50 ₼Чулки Gabriella Erotica Calze Lux 644, 15den, размер 1(XS)/2(S), черныйПродавец:Bantik.az, Rose Store

14.50 ₼Чулки Gabriella Erotica Calze Classic 643, 15den, размер 3(M)/4(L), черныйПродавец:Bantik.az, Rose Store

14. 50 ₼Чулки Gabriella Erotica Calze Classic 643, 15den, размер 1(XS)/2(S), черныйПродавец:Bantik.az, Rose Store

11.50 ₼Колготки Gabriella Cacti 42504126, 20den, размер 4(L), Nero, черныйПродавец:Bantik.az, Rose Store

11.50 ₼Колготки Gabriella Cacti 42503126, 20den, размер 3(M), Nero, черныйПродавец:Bantik.az, Rose Store

-10 %

4.50 ₼5 ₼Колготки Gabriella Classic, 15 den, размер 2, черныеПродавец:Rose Store, Bantik.az

3.80 ₼Чулки Golden Lady Gambaletto, 15 den, размер 2, бежевыеПродавец:Kapriz Cosmetics, Alix Avien shop, Bantik….

4.10 ₼Колготки Golden Lady Ciao, 20 den, размер 3(M)Продавец:Alix Avien shop, Bantik.az

4.10 ₼Колготки Golden Lady Ciao 20 den, размер 5(XL), Visone, Средний загарПродавец:Alix Avien shop, Bantik.az

Роз Никсон — оригинальная работа — природа — ребенок — маленькая девочка

Избранное |
Создать учетную запись |
Логин

(0) Тележка

by art витрины

Trusted Art Seller

Наличие этого значка означает, что этот бизнес официально зарегистрирован в Организации витрин художественных магазинов и имеет успешный опыт продажи произведений искусства.

Это также означает, что покупатели могут быть уверены, что покупают у законного предприятия. У продавцов произведений искусства, ведущих мошенническую деятельность или получающих многочисленные жалобы от покупателей, этот значок будет аннулирован. Если вы хотите подать жалобу на этого продавца, пожалуйста, сделайте это здесь.

Подтвержденный возврат и обмен

Организация Art Storefronts Organization подтвердила, что эта компания предоставила правила возврата и обмена для всех покупок произведений искусства.

Описание политики продавца:

Возврат и обмен ТОЛЬКО поврежденных или неправильных печатных материалов. Возврат или обмен оригинального произведения искусства невозможен, если только изделие не было повреждено по вине нашего процесса упаковки. Мы фотографируем и страхуем все посылки, отправленные напрямую из Художественной галереи на улице Коллин.

Подтвержденный безопасный веб-сайт с безопасной оплатой

Этот веб-сайт обеспечивает безопасную проверку с шифрованием SSL.

Ваша корзина пуста.

Сохранено успешно.

Это видно только вам, потому что вы вошли в систему и уполномочены управлять этим веб-сайтом. Это сообщение не видно другим посетителям сайта.

×

Импорт из Instagram

Нажмите на любое изображение, чтобы продолжить

• Мои любимые (0)

• Добавить список избранного

• Управление списками избранного

Создать новый список избранного

×

Этот веб-сайт поддерживает дополненную реальность для предварительного просмотра произведений искусства в реальном времени

Это означает, что вы можете использовать камеру на своем телефоне или планшете и накладывать любое произведение искусства на стену внутри вашего дома или офиса.

Чтобы использовать эту функцию, просто найдите кнопку «Live Preview AR» при просмотре любого произведения искусства на этом сайте!

Уверенно покупайте произведения искусства с помощью инструмента предварительного просмотра стены. Выберите предварительно загруженную настройку комнаты или загрузите собственное изображение, а затем отрегулируйте цвет стены и размер художественного произведения, чтобы найти идеальное решение для вашего помещения.

Цвет стены

Размер:
8×10

Каркас:

Комната:
ГостинаяДомашний офисСпальняДетскаяКонференц-залКафеРецепцияРесторан

Загруженное изображение должно быть 1500 x 723 пикселей для точного предварительного просмотра

7 футов / 213 см

НАДЕЖНЫЙ ПРОДАВЕЦ ИСКУССТВ

Этот бизнес официально зарегистрирован и имеет опыт продажи произведений искусства. Art Storefronts Organization

Покупатели могут быть уверены, что покупают у законного предприятия. У продавцов произведений искусства, ведущих мошенническую деятельность или получающих многочисленные жалобы от покупателей, этот значок будет аннулирован. Если вы хотите подать жалобу на этого продавца, пожалуйста, сделайте это здесь.

Для правильного масштабирования встаньте

10
ноги
от стены.

Вы также можете перетащить изображение в нужное место.

Сделайте идеальный выбор с Live Preview: инструментом дополненной реальности, который оживляет произведения искусства на ваших стенах, чтобы вы могли найти изображение, которое сделает ваше пространство по-настоящему особенным.

Размер:
8×10

Для наилучших впечатлений,

Просмотр на мобильном устройстве!

Отправить себе ссылку сюда:

Электронная почта

Отправлено!
Ошибка!

Похоже, ваша камера остановилась.

Все в порядке. Все, что вам нужно сделать, это обновить страницу, чтобы она снова заработала.

В некоторых случаях может потребоваться закрыть и перезапустить браузер или перезапустить устройство, чтобы камера снова работала с браузером.

Обновить страницу

Для функции Live Preview требуется современный браузер, поддерживающий возможность запуска камеры из браузера. Если вы считаете, что ваше устройство поддерживает эту функцию, вам может потребоваться перезагрузить эту страницу , чтобы браузер снова попытался активировать вашу камеру.

Возможность активировать камеру в браузере в настоящее время поддерживается Google Chrome, Mozilla Firefox и Opera как в настольной версии, так и в версии для Android. Он поддерживается браузером Apple Safari версии 11 и выше. Microsoft Internet Explorer еще не добавил поддержку этой функции.

Если это не работает, мы рекомендуем отправить ссылку на совместимое устройство по электронной почте или просто использовать
Инструмент предварительного просмотра стены >>

Обновить страницу

Для использования этой функции необходимо использовать браузер Safari .

Для функции Live Preview требуется современный браузер, поддерживающий возможность запуска камеры из браузера. В настоящее время Apple позволяет использовать эту функцию только в браузере Safari. Это может позволить Chrome и другие в будущем.

Пожалуйста, откройте браузер Safari, снова посетите эту страницу, и все будет готово!

Обновить страницу

Разрешите доступ к вашей камере, чтобы использовать приложение AR Live Preview.

Все, что вам нужно сделать, это открыть браузер (например, Safari, Chrome, Firefox) на вашем устройстве, открыть эту страницу в этом браузере, а затем разрешить приложению использовать вашу камеру.

Обновить страницу

Для использования этой функции необходимо попробовать другой браузер.

Для функции Live Preview требуется браузер, поддерживающий возможность запуска камеры заднего вида из браузера.

Пожалуйста, откройте другой браузер (Firefox или браузер по умолчанию), снова посетите эту страницу, и все будет хорошо!

Обновить страницу

×

Отправить это изображение своим друзьям

Ваше имя

Ваша фамилия

Ваш адрес электронной почты (это будет адрес электронной почты «от»)

На электронную почту (введите адреса электронной почты получателей)

×

Управление избранным

Ниже выберите списки избранного, в которые вы хотите сохранить этот продукт.

СКИДКА 20% НА ПЕРВЫЙ ЗАКАЗ!

Введите свой адрес электронной почты ниже, и   w e отправит вам купон на 20% СКИДКУ по электронной почте прямо сейчас!

Электронная почта

= требуется

Это предложение действительно только для НОВЫХ КЛИЕНТОВ !

Взгляд на катализ и функцию фосфорибозил-связанного убиквитинирования серина

Ссылки

1. Гершко А., Чехановер А. и Варшавский А. Система убиквитина. Нац. Мед. 6 , 1073–1081 (2000).

   Артикул
   пабмед
   КАС

   Google Scholar

2. Цю, Дж. и др. Убиквитинирование бактериальными эффекторами независимо от ферментов Е1 и Е2. Природа 533 , 120–124 (2016).

   Артикул
   ОБЪЯВЛЕНИЯ
   пабмед
   ПабМед Центральный
   КАС

   Google Scholar

3. Бхогараджу, С. и др. Фосфорибозилирование убиквитина способствует убиквитинированию серина и нарушает обычное убиквитинирование. Cell 167 , 1636–1649.e13 (2016).

   Артикул
   пабмед
   КАС

   Google Scholar

4. Вонг К., Козлов Г., Чжан Ю. и Геринг К. Структура эффектора Legionella , lpg1496, предполагает роль в метаболизме нуклеотидов. Дж. Биол. хим. 290 , 24727–24737 (2015).

   Артикул
   пабмед
   ПабМед Центральный
   КАС

   Google Scholar

5. Ji, X. et al. Механизм аллостерической активации SAMHD1 с помощью dGTP. Нац. Структура Мол. биол. 20 , 1304–1309 (2013).

   Артикул
   пабмед
   ПабМед Центральный
   КАС

   Google Scholar

6. Simon, N.C., Aktories, K. & Barbieri, JT. Новые бактериальные АДФ-рибозилирующие токсины: структура и функция. Нац. Преподобный Микробиолог. 12 , 599–611 (2014).

   Артикул
   пабмед
   ПабМед Центральный
   КАС

   Google Scholar

7. Баррио, Дж. Р., Секрист, Дж. А. III и Леонард, Нью-Джерси. Флуоресцентный аналог никотинамидадениндинуклеотида. Проц. Натл акад. науч. США 69 , 2039–2042 (1972).

   Артикул
   ОБЪЯВЛЕНИЯ
   пабмед
   ПабМед Центральный
   КАС

   Google Scholar

8. Донг Ю. и др. Структурные основы модификации убиквитина Legionella эффектор SdeA. Природа https://doi.org/10.1038/s41586-018-0146-7 (2018).

9. «>

   Котевич, К. М. и др. Единственный эффектор Legionella катализирует многоэтапный путь убиквитинирования для перестройки тубулярного эндоплазматического ретикулума для репликации. Микроб-хозяин клетки 21 , 169–181 (2017).

   Артикул
   пабмед
   КАС

   Google Scholar

10. Matte, A., Tari, L.W. & Delbaere, L.T. Как киназы переносят фосфорильные группы? Структура 6 , 413–419 (1998).

    Артикул
    пабмед
    КАС

    Google Scholar

11. Ки, Дж.-М. и Мьюир, Т. В. Чейзинг фосфогистидин, неуловимый родственник в семействе фосфоаминокислот. ACS Хим. биол. 7 , 44–51 (2012).

    Артикул
    пабмед
    КАС

    Google Scholar

12. Fuhs, S. R. et al. Моноклональные 1- и 3-фосфогистидиновые антитела: новые инструменты для изучения фосфорилирования гистидина. Cell 162 , 198–210 (2015).

    Артикул
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

13. Лима, К.Д., Кляйн, М.Г. и Хендриксон, В.А. Структурный анализ катализа и определение субстрата в семействе белков HIT. Наука 278 , 286–290 (1997).

    Артикул
    пабмед
    КАС

    Google Scholar

14. Актюрк А. и др. Механизм фосфорибозил-убиквитинирования опосредуется одним эффектором Legionella . Природа https://doi.org/10.1038/s41586-018-0147-6 (2018).

15. Thomsen, M.C.F. & Nielsen, M. Seq2Logo: метод построения и визуализации мотивов связывания аминокислот и профилей последовательностей, включая взвешивание последовательностей, псевдосчет и двустороннее представление обогащения и истощения аминокислот. Рез. нуклеиновых кислот. 40 , W281–W287 (2012 г. ).

    Артикул
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

16. Нильсен, М. и Андреатта, М. NNAlign: платформа для создания и оценки моделей искусственных нейронных сетей взаимодействий рецептор-лиганд. Рез. нуклеиновых кислот. 45 , W344–W349 (2017 г.).

    Артикул
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

17. Кабш, В. XDS. Акта Кристаллогр. Д
    66 , 125–132 (2010).

    Артикул
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

18. Adams, P.D. et al. PHENIX: комплексная система на основе Python для решения макромолекулярной структуры. Акта Кристаллогр. Д 66 , 213–221 (2010).

    Артикул
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

19. «>

    Cowtan, K. Программное обеспечение Buccaneer для автоматизированного построения моделей. 1. Отслеживание белковых цепей. Акта Кристаллогр. Д
    62 , 1002–1011 (2006 г.).

    Артикул
    пабмед
    КАС

    Google Scholar

20. Эмсли П., Локамп Б., Скотт В. Г. и Коутан К. Особенности и развитие Coot. Акта Кристаллогр. Д
    66 , 486–501 (2010).

    Артикул
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

21. Bricogne, G. et al. BUSTER, версия 2.10.2 (Великобритания Global Phasing Ltd., Кембридж, 2017 г.).

22. Franke, D. et al. ATSAS 2.8: комплексный набор для анализа данных малоуглового рассеяния в растворах макромолекул. Дж. Заявл. Кристаллогр. 50 , 1212–1225 (2017).

    Артикул
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

23. «>

    Franke, D. & Svergun, D.I. DAMMIF, программа для быстрого определения формы ab-initio при малоугловом рассеянии. Дж. Заявл. Кристаллогр. 42 , 342–346 (2009).

    Артикул
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

24. Свергун Д.И. Восстановление структуры биологических макромолекул низкого разрешения из растворов рассеяния с помощью имитации отжига. Биофиз. J. 76 , 2879–2886 (1999).

    Артикул
    ОБЪЯВЛЕНИЯ
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

25. Свергун, Д., Барберато, К. и Кох, М. Х. Дж. IUCr. CRYSOL — программа для оценки рассеяния рентгеновских лучей биологическими макромолекулами в растворах от атомных координат. Дж. Заявл. Кристаллогр. 28 , 768–773 (1995).

    Артикул
    КАС

    Google Scholar

26. «>

    Козин М.Б., Свергун Д.И. Автоматическое сопоставление структурных моделей высокого и низкого разрешения. Дж. Заявл. Кристаллогр. 34 , 33–41 (2001).

    Артикул
    КАС

    Google Scholar

27. Гетце, М. и др. StavroX — программное обеспечение для анализа сшитых продуктов в исследованиях взаимодействия белков. Дж. Ам. соц. Масс-спектр. 23 , 76–87 (2012).

    Артикул
    пабмед
    ОБЪЯВЛЕНИЯ
    КАС

    Google Scholar

28. Бергер, К. Х. и Исберг, Р. Р. Два различных дефекта внутриклеточного роста, дополненные одним генетическим локусом в Legionella pneumophila . Мол. микробиол. 7 , 7–19 (1993).

    Артикул
    пабмед
    КАС

    Google Scholar

29. Сюй, Л. и др. Ингибирование вакуолярной активности H ⁺ -АТФазы хозяина эффектором Legionella pneumophila . PLoS Патог. 6 , e1000822 (2010 г.).

    Артикул
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

30. Луо З.-К. и Исберг, Р. Р. Множественные субстраты системы Legionella pneumophila Dot/Icm, идентифицированные с помощью межбактериального переноса белка. Проц. Натл акад. науч. США 101 , 841–846 (2004 г.).

    Артикул
    ОБЪЯВЛЕНИЯ
    пабмед
    ПабМед Центральный
    КАС

    Google Scholar

Скачать ссылки

Благодарности

Мы благодарим J. Vogel за подарок анти-SidC сыворотки, R. Prabu за помощь в анализе общей массы протеолиза SdeA, Ö. Йилдиз за то, что поделился синхротронным временем, А. Чайкуад за первоначальный дизайн конструкции SdeA, Т. Хантер и К. Лима за советы по протоколам гистидинового промежуточного звена, Т. Ханке за схему механизма PDE и обсуждение, Т. Колби и И. Матич за их помогите с определением сайтов убиквитинирования RTN4B с помощью ЖХ-МС/МС, а Б. Шульман и Д. Скотт за консультации по кристаллографии. Время луча Swiss Light Source было частью предложения 2016 1958. Мы благодарим сотрудников SLS за помощь в сборе данных, а также Э. Вешкову, С. Родригеса Гомеса, С. Еленич и Ф. Милькович за техническую помощь; K. Koch, D. Höller, V. Dötsch и S. Knapp за комментарии к статье; и группа Д. Свергуна на линии луча P12, PETRA III, EMBL-DESY для сбора данных SAXS. Эта работа была поддержана iNEXT (PID: 3515), финансируемым DFG Центром совместных исследований селективной аутофагии (SFB 1177), Европейским исследовательским советом (ERC) в рамках исследовательской и инновационной программы Horizon 2020 Европейского Союза (соглашение о гранте № 742720). , финансируемый DFG Кластер передового опыта «Макромолекулярные комплексы» (EXC115), финансируемая DFG программа SPP 1580 «Внутриклеточные компартменты как места взаимодействия патоген-хозяин» (ID) и программа LOEWE Ubiquitin Networks (Ub -Net) и Центр генной и клеточной терапии LOEWE во Франкфурте (CGT), оба финансируются землей Гессен/Германия. Грант NIH-NIAID R01AI127465 поддерживает Z.-Q.L. Работа С.Б. также финансируется за счет гранта Университета Гёте Nachwuchsforscher.

Информация для рецензентов

Nature благодарит К. Геринга и других анонимных рецензентов за их вклад в рецензирование этой работы.

Информация об авторе

Примечания автора

1. Эти авторы внесли равный вклад: Sissy Kalayil, Sagar Bhogaraju.

Авторы и аффилированные лица

1. Институт биохимии II, Франкфуртский университет им. Гёте – Медицинский факультет, Университетская клиника, Франкфурт-на-Майне, Германия 9Тел. Donghyuk Shin, Yaobin Liu & Ivan Dikic

2. Институт иммунологии, воспалений и инфекционных заболеваний Purdue и отделение биологических наук, Университет Purdue, Западный Лафайет, Индиана, США

   Ninghai Gan & Zhao-Qing Luo

3. Max Planck Institute of Biochemistry, Department of Structural Cell Biology, Martinsried, Germany

   Jérôme Basquin

Authors

1. Sissy Kalayil

   View author publications

   You can также ищите этого автора в
   PubMed Google Scholar

2. Sagar Bhogaraju

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в
   PubMed Google Академия

3. Флориан Бонн

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в
   PubMed Google Scholar

4. Donghyuk Shin

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в
   PubMed Google Scholar

5. Yaobin Liu

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в
   PubMed Google Scholar

6. Нинхай Ган

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в
   PubMed Google Scholar

7. Jérôme Basquin

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в
   PubMed Google Scholar

8. Paolo Grumati

   Просмотр публикаций автора

   Вы также можете искать этого автора в
   PubMed Google Scholar

9. Zhao-Qing Luo

   Посмотреть публикации автора

   Вы также можете искать этого автора в
   PubMed Google Scholar

10. Ivan Dikic

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в
    PubMed Google Scholar

Contributions

S. K., S.B. и И.Д. задумал проект. С.К. проведена начальная кристаллизация. С.К. и С.Б. выполнили оптимизацию кристаллов, структурное решение, очистку белков и биохимию. JB способствовал кристаллизации и структурному решению. Ф.Б. провел масс-спектрометрию. DS выполнил SAXS и внес свой вклад в очистку белка. Ю.Л. и П.Г. провел эксперименты с SdeA _ФЗ . Н.Г. проводили эксперименты с бактериальной инфекцией. С.К., С.Б., З.-К.Л. и И.Д. проанализировал данные. С.К., С.Б. и И.Д. написал рукопись. ИДЕНТИФИКАТОР. курировал проект.

Автор, ответственный за переписку

Иван Дикич.

Заявление об этике

Конкурирующие интересы

Авторы не заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Дополнительная информация

Примечание издателя: Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

Рисунки и таблицы с расширенными данными

Расширенные данные Рис.

1 Каталитический сердечник — SdeA _213–907 .

a , Ограниченный протеолиз фрагмента SdeA 193–998 и последующий анализ фрагментов с помощью окрашенного кумасси геля SDS и анализ общей массы с помощью масс-спектрометрии. b , Убиквитинирование Rab33b in vitro с помощью SdeA _FL и SdeA _213–907 . c , слева, профиль рассеяния SdeA _213–907 с рассчитанной кривой рассеяния на основе кристаллической структуры. Область Гунье показана на вставке. Вверху справа: модель шариков ab initio от DAMMIN, наложенная на кристаллическую структуру и показанная в двух ориентациях. Внизу справа график распределения парных расстояний и результаты подбора модели DAMMIN. Эксперименты были повторены независимо дважды с аналогичными результатами ( а , б ). Данные об источнике геля см. на дополнительном рисунке 1.

Исходные данные.

Расширенные данные Рис. 2 Роль AHL в SdeA.

a , анализ гидролиза ε-NAD ⁺ в присутствии SdeA (SdeA _213–907 или SdeA _{213–907ΔAHL} ) и убиквитина (дикого типа или R27_R42A). b , c , Анализ убиквитинирования in vitro с мутациями в петлях, соединяющих АГЛ с ФДЭ и каталитическим ядром mART в SdeA _213–907 ( b ) и в SdeA _FL ( c ). d , Убиквитинирование субстрата и модификация убиквитина с помощью SdeA _FL и SdeA _213–907 в клетках HEK293T. Антитела Abcam Ub и Cell Signaling Ub использовали для мониторинга уровней немодифицированного убиквитина и общего убиквитина соответственно. e , Ограниченный анализ протеолиза различных конструкций SdeA. Все эксперименты были повторены независимо дважды с аналогичными результатами. Данные об источнике геля см. на дополнительном рисунке 1. 9.0004

Исходные данные.

Расширенные данные Рис. 3 Характеристика домена mART.

a , Наложение ядра mART SdeA на ядро ​​NAD ⁺ , связанного со структурой йота-токсина (PDB: 4H0Y) из Clostridium perfringens , который АДФ-рибозилирует актин клеток-хозяев. Остатки в SdeA, которые, как предполагается, важны для связывания и гидролиза NAD ⁺ , помечены. b , Анализ убиквитинирования in vitro с NAD ^{+ 9Мутанты сайта связывания 0499 в ядре mART SdeA _213–907 . c , Остатки на границе между ядром mART и AHL в проксимальной конформации (AHL _prox ). d , Анализы убиквитинирования in vitro с мутантами SdeA _213–907 Интерфейсные остатки mART core-AHL _prox , указанные в c . e , Сравнение гидролиза ε-NAD + с помощью SdeA _213–907 и мутантов сайта связывания NAD + и мутантов, нарушающих предсказанное ядро ​​mART – AHL _прокси взаимодействие. f , Анализы убиквитинирования in vitro с мутантами SdeA _FL mART core – интерфейсные остатки AHL _prox , указанные в c . Эксперименты были повторены независимо дважды с аналогичными результатами. Данные об источнике геля см. на дополнительном рисунке 1.}

Исходные данные.

Расширенные данные Рис. 4 Взаимодействие между PDE и ядром mART.

a , Детали взаимодействия между SdeA PDE и ядром mART. Важные остатки, опосредующие взаимодействие, указаны на вставках. b , c , Тестирование убиквитинирования субстрата и модификации убиквитина in vitro с помощью мутантов взаимодействия ядра PDE-mART в SdeA _213–907 ( b ) и SdeA _FL ( c 9). Эксперименты были повторены дважды независимо друг от друга с аналогичными результатами. Данные об источнике геля см. Дополнительный рисунок 1.

Расширенные данные Рис. 5 Гистидиновый промежуточный продукт в катализе SdeA.

a , Реакции убиквитинирования in vitro различными SdeA _213–907 Гистидиновые мутанты сайта PDE, зондированные с помощью окрашенного кумасси SDS-PAGE. b , Высокоэнергетическая фрагментация HCD использовалась для создания фрагментов пептидного остова. Мы смогли идентифицировать несколько фрагментов SdeA _275–284 и Ub _34–48 , чтобы дополнительно подтвердить идентичность активного сайта с мостиком. c , Реакция убиквитинирования in vitro с помощью мутанта SdeA _213–907 (h507N) с использованием убиквитина, меченного родамином. d , Реакция убиквитинирования in vitro с использованием убиквитина, меченного HA. e , Реакция убиквитинирования in vitro с помощью SdeA _213–907 (h507N) без нагревания и при нагревании с использованием фосфокрасителя. f , Реакция убиквитинирования in vitro с использованием HA-убиквитина различными мутантами PDE. Эти эксперименты были повторены независимо дважды с аналогичными результатами. Данные об источнике геля см. на дополнительном рис. 1.

. Расширенные данные. Рис. 6. Каталитический сайт домена PDE.

a , Убиквитинирование Rab33b in vitro мутантами SdeA PDE. б , анализы убиквитинирования in vitro с мутантами каталитического сайта PDE. c , Анализы убиквитинирования Rab33b in vitro с мутантами каталитического сайта GFP-SdeA _FL PDE, очищенными из клеток HEK293T. Эти эксперименты были повторены независимо дважды с аналогичными результатами. Данные об источнике геля см. Дополнительный рисунок 1.

Расширенные данные Рис. 7 Специфичность SdeA к субстрату.

a , b , Спектры фрагментации мостикового пептида, указывающие сайты убиквитинирования RTN4B. Эти опыты были проделаны один раз. c , Мотив последовательности целевых сериновых последовательностей SdeA, вычисленный с помощью Seq2Logo.

Дополнительные данные Рис. 8 Химическое ингибирование SdeA.

a Химическая структура аденозин-5′-тиомонофосфата (5′-AMPS). b , 5′-AMPS-опосредованное ингибирование PR-убиквитинирования Rab33b с помощью SdeA _FL , SdeA _213–597 и SdeA _213–907 в присутствии ADPR-Ub. c , 5′-AMPS-опосредованное ингибирование PR-убиквитинирования RTN4B с помощью SdeA _ФЗ . d , Убиквитинирование in vitro с помощью SdeA _FL в присутствии возрастающих концентраций 5′-AMPS и AMP. e , Очевидные константы ингибирования ( K _i ) AMP и 5′-AMPS против SdeA _FL , рассчитанные на основе количественного определения убиквитинирования субстрата, показанного в d . f , домен PDE SdeC убиквитинирует Rab33b и RTN4B. г , Влияние 5′-AMPS на убиквитинирование с помощью SdeC PDE. Эти эксперименты были проведены дважды независимо друг от друга с аналогичными результатами. Данные об источнике геля см. на дополнительном рисунке 1. 9.0004

Исходные данные.

Дополнительные данные Рис. 9 Влияние мутаций, связывающих субстрат SdeA, in vivo.

a , Анализы убиквитинирования Rab33b in vitro с использованием субстрат-связывающих мутантов GFP-SdeA _FL , выделенных из клеток HEK293T. b , Экспрессия и транслокация SdeA с использованием дикого типа и различных мутантных штаммов Legionella . c , изменение кратности КОЕ, отслеживаемое в диком типе Legionella и штамме sidEs , дополненном мутантными плазмидами с дефектом убиквитинирования субстрата ( n  = 3 биологических повтора). Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. d , Совместная локализация вакуолей, содержащих Legionella , и сетей RTN4 в первичных макрофагах мыши. Эксперименты с а , b и d были повторены дважды независимо друг от друга с аналогичными результатами. Данные об источнике геля см. на дополнительном рисунке 1.

Исходные данные.

Расширенные данные Рис. 10 Профиль эксклюзионной хроматографии SdeA

_FL .

SdeA _FL демонстрирует поведение димеров в колонке для эксклюзионной хроматографии (Superdex 200 16/60). Этот эксперимент был повторен дважды независимо с аналогичными результатами. На вставке n  = 1. MW, молекулярная масса. Данные об источнике геля см.