Ольги арефьевой одностишья: бесподобные одностишья Ольги Арефьевой

02.02.2023 by admin Комментариев нет

Содержание

бесподобные одностишья Ольги Арефьевой

Чем хуже голос, тем короче юбка…

Люблю вас. Просто в очень редкой форме.

Любить Вас с Вами легче, чем без Вас…

Лежать, молчать! А то я растеряюсь…

И ты любви покорен? Это возраст…

Опять мы так бездарно артистичны…

Забыла. Мы чего уединились?

Я гений. Парадоксы — лишь прикрытье…

А мне легко всё время прибедняться?

Я влюблена, бесспорно. Но в кого?

Вам садо-мазо? Ну садитесь, мажьтесь.

Я даже в глупостях порой умней, чем надо…

Да, ты по-крупному умеешь мелочиться…

Как утомляет симулировать нормальность…

Приятно в голых фактах быть одетой.

Вы снились мне! Не смейте отпираться!

Ты смотришься на фоне идиотов.

Блестящ твой ум. Жаль, дураку достался…

Не йог я. Так, выёживаюсь просто.

Не дашь ли мне… И это тоже можно.

В «люблю тебя» фрейдистское есть что-то!

Любимых и родных не выбирают. ..

Ты темперамент с суетливостью не путай…

Ты что, не рад мне, милый? А придётся.

Он даже сушки ест ножом и вилкой!

Я невменяема! А мне тут всё вменяют…

Уж зла любовь, ну а козла всё нету…

Ты просто так лежишь или с намёком?

Мы — глубоко поверхностные люди!

Вы каждый раз по-новому банальны.

Недоборолся он с зелёным змием… (эпитафия)

На мне — жениться? А ещё на мне что делать?!

Мы раздвоеньем с эго не страдаем… (альтер эго)

Вам всем бы памятник! А то вас не упомнишь…

Он испугался мыслей с непривычки.

Противный, но в хорошем смысле слова…

Был счастлив дважды — в свадьбе и в разводе.

Нормальность в этом мире неуместна.

Два звонаря на колокольнях: Созвонимся!

Обман был вскрыт. И вскрытье показало…

Мы все во что-нибудь недоиграли…

Со мною — ей? Ну, это не измена.

Не жертвуйте собой, когда не просят!

Чего хочу, то и не буду делать!

Как женщины коварны: не хотят!

Я Вас любил. С устатку и не емши…

О, не мешайте мне побыть несчастной!

Урод в семье торговцев: к о м п о з и т о р…

Нырнул от комаров — пришли пиявки.

Не так уж чтобы очень — но безмерно!

Тошнит от всех проглоченных обид…

Дуэль не удалась: мы оба живы.

Непобедим, поскольку не играет.

Уйди, я одинока не настолько!

Сегодня твоя тупость в острой фазе…

Купил ты не того. И СЛИШКОМ МАЛО!!!

Как трудно делать вид, что мы знакомы…

Не все фригидны, кто тебя не хочет!

Люблю людей, но только в малых дозах.

Ну нет, в неволе я не размножаюсь!

Назвать — меня! — мечтою идиота?

Я всё могу — тогда, когда не надо.

Куда вы выходили из себя?

Что, так и будем стоя обниматься?

И врал он искренне и заблуждался честно.

Чем шире харя, тем мощней харизма.

Ольга Арефьева — Одностишия (сборник) читать онлайн бесплатно

12 3 4

Ольга Арефьева

Одностишия (сборник)

* * *

Ольга Арефьева родилась в 1966 году на Урале, в городе Верхняя Салда Свердловской области.

В 1983 году переехала в Свердловск (ныне Екатеринбург). Два года проучилась в университете на физика, но внезапно для окружающих ушла и закончила Свердловское музыкальное училище по классу эстрадного вокала.

С 1990 года Ольга Арефьева живет в Москве, где создала группу «Ковчег», с которой постоянно выступает по сей день. В 1995 году закончила Институт им. Гнесиных по классу эстрадного вокала.

Ольгой написано более 400 песен. На сегодняшний день она выпустила 18 музыкальных дисков.

Кроме концертной и гастрольной деятельности Ольга Арефьева активно занимается своими хобби – современным танцем, визуальным театром, жонглированием, фотографией, созданием видеоклипов, а также ведёт тренинги по голосу, речи и движению. Сайт, посвященный творчеству Ольги, – www.ark.ru

В сотрудничестве с издательством Livebook Ольга в 2007 году выпустила книгу мистической прозы «Смерть и приключения Ефросиньи Прекрасной», в 2008 – первую книгу одностиший, в 2014 – книгу детских стихов «Иноходец».

Сейчас вашему вниманию предлагается ее четвертая книга, куда вошли одностишия, лимерики, бляблики, двустишия и мелочи.

Предисловие

В русской культуре есть свои дзенские коаны: эту почётную роль играют анекдоты. В лучших из них мир содержится в сжатой форме. Зависание мозга при встрече с другим измерением, распаковывание архива и катарсическая разрядка в виде здорового смеха – вот он, хлопок одной ладони! Эти признаки относятся, на мой взгляд, и к молодой поэтической форме – одностишиям. Мелкотравчатый этот жанр – не большая, конечно, поэзия, а нечто близкое к афоризму, анекдоту. Их очень любит народ и активно цитирует. Самые ценные экземпляры этих одноклеточных созданий содержат интригу в развитии. Короткая фраза выхвачена ножницами из непрерывного фильма жизни: мы не знаем ни начала, ни конца истории. Герои и их отношения остаются за кадром, но угадываются по проявлениям, тону, жесту. Таким образом обломок достраивается в голове до цельной картины, часто парадоксальной и всегда смешной.

Для меня одностишия были и остаются литературным развлечением, приносящим много радости. Я вроде бы другим в жизни занимаюсь. Хотя, как кто-то из читателей мне написал, – Кэрролл тоже считал, что в основном занимается математикой.

Ольга Арефьева

Одностишия

Фото Елены Калагиной

Вставай, корми уже своих драконов!

Ещё раз пса продать не получилось…

Мы – тоже планетяне! Только ино-!

Нет, я не собака, я с Альфа Центавра!

Я принц и белый конь в одном лице!

Ну что как конь тут ходишь? Буквой «Г»!

С подругой, идентичной натуральной…

Фото Андрея С.

Я бы сняла парик, но в нём теплее!

Надеть сегодня нимб или рога?

Я был так трезв, что мир предстал ужасным.

Пришел на карнавал в посмертной маске…

Я много лет мечтал побыть собой…

На хэллоуин вам можно и без грима.

Я просто тут стою для красоты!

Фото Елены Калагиной

А можешь умирать немного тише?

Мерзавец! Гад! Алкаш! Подлец! Вернись!

У них там за стенкой орательный секс!

А ты, хоть и прав – но противный зануда!

Он о любви умел лишь материться…

Вот это одностишье! Прям Шекспир!

Прививку от неистовства. Коту! (а не от бешенства)

Создал всех вас – и сразу стало шумно!

Не верят, гады, что я их создатель!

Так это вы зачинщик христианства?

Я должен признаться: я вас сочинил…

До вас дозвониться сложней, чем до Бога!

Надеюсь, Бог в нас тоже верит?

У нас в театре можно только всё!

Фото Елены Калагиной

Фото Ольги Арефьевой

Сегодня я из вежливости трезв!

Нагрянул тут, давай махать харизмой…

Нет, я не гений! Просто очень умный…

За эти деньги я и сам лоялен!

И я, как муж, всё узнаю последней!?

Гад! Скрипкой поцарапал мой бульдозер!

Я вас хотел не только как министра!

Фото Андрея С.

Вот этот тебя сексуально привлек?

Пойдёшь пособием на курсы «секс без денег»?

Весь наш генофонд недостоин тебя!

Нет, вы не секс-символ, а секс-сувенир!

Как член Ку-клукс-клана, он незаменим!

Нет, он мне не любовник, а любимый!

Не бойся, я не лезу целоваться!

Фото Светланы Белкиной

Расправил гордо справку: «Невменяем»!

Я тихо ухожу в легенды рока.

(И громко ухожу в легенды секса)

Дух перезагрузить бы в том же теле!

(Не умирать, но заново родиться)

Я сделал многое, хоть это незаметно.

Звезда я давно, но успешно – недавно.

Работать я люблю, но не хочу.

Ты остроумна как баян в кустах!

Я за тобой как за лохматою стеной.

Не «Лесбиянки» книга! «Лес» Бианки!

Вы что, разлили джинна? Там две «н»!

Но шкура медведя пока не убита!

Просила цветочек – прислали тебя!

В жилье со зверем шерсть – приправа!

Я облысел, но торс ещё мохнатый!

Фото Елены Коваль

Я – Абсолют. И пью его же!

Как ты живешь – с прыщом на попе?

Зарядка для ума – дебилдинг.

Возьмем трамвай, закажем коржик…

Я сыт, не суй мне больше титьку!

Достал и съел топор из супа!

Весна-красна, поплыли говны…

Как можно жить такого цвета?

Ты шибко умный, хоть и глупый…

Двурушник – это амбидекстор?

Муж? Кто-то рядом телепался…

До блеска наточили лясы…

Сжёг Мертвых душ? Но не живых же!

Дурак ты, сверкал пред начальством умом…

Гей-бар. Смотреть стриптиз и плакать…

Секс-шоп: снаружи вроде всё прилично…

Таким казался умным сзади…

Ваш суп – говно! И цвет такой же!

Придирки вновь? Ну пьяный, ну в крови…

У нас тут в синагоге пейс-контроль!

А здесь у меня на постели – сантехник!

12 3 4

СРБ транспортируется моноцитами и экзосомами, происходящими из моноцитов, в крови пациентов с ишемической болезнью сердца

. 2020 19 октября; 8 (10): 435.

doi: 10.3390/биомедицины8100435.

Иван Мельников ¹

2
, Сергей Козлов ¹ , Ольга Сабурова ¹ , Екатерина Зубкова ¹ , Ольга Гусева ¹ , Сергей Домогацкий ¹ , Татьяна Арефьева ¹ , Наталья Радюхина ¹ , Мария Зверева ¹ , Юлия Автаева ¹ , Людмила Бурячковская ¹ , Зуфар Габбасов ¹

Принадлежности

¹ Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии Минздрава России, 3-я Черепковская улица, Москва 121552, дом 15А, Россия.
² Государственный научный центр Российской Федерации-Институт медико-биологических проблем Российской академии наук, Хорошевское шоссе, Москва 123007 76А, Россия.

PMID:
33086769
PMCID:
PMC7589628
DOI:
10.3390/биомедицина8100435

Бесплатная статья ЧВК

Иван Мельников и др.

Биомедицины.

2020 .

Бесплатная статья ЧВК

. 2020 19 октября; 8 (10): 435.

doi: 10.3390/биомедицины8100435.

Авторы

Иван Мельников ¹

Принадлежности

¹ Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии Минздрава России, 3-я Черепковская улица, Москва 121552, дом 15А, Россия.
² Государственный научный центр Российской Федерации-Институт медико-биологических проблем Российской академии наук, Хорошевское шоссе, Москва 123007 76А, Россия.

PMID:
33086769
PMCID:
PMC7589628
DOI:
10.3390/биомедицина8100435

Абстрактный

Целью данной работы было изучение способности клеток крови и их микрочастиц транспортировать мономерные и пентамерные формы С-реактивного белка (мСРБ и пСРБ) в крови больных ишемической болезнью сердца (ИБС). Кровь получена от 14 больных ИБС в возрасте 46 ± 13 лет и 8 здоровых добровольцев 49± 13,6 лет. Клетки крови и микрочастицы с мСРБ и пСРБ на поверхности выявляли методом проточной цитометрии. Информационную РНК (мРНК) СРБ выделяли из моноцитов периферической крови, стимулированных липополисахаридом (ЛПС) и гранулоцитарно-макрофагальным колониестимулирующим фактором (ГМ-КСФ). мРНК СРБ в моноцитах выявляли с помощью ПЦР. Моноциты были преимущественно pCRP-позитивными (92,9 ± 6,8%). mCRP присутствовал на 22,0 ± 9,6% экзосом, происходящих из моноцитов. Количество мСРБ-положительных микрочастиц лейкоцитарного происхождения было значительно выше (8764 ± 2876/мкл) в крови пациентов с ИБС, чем у здоровых добровольцев (1472 ± 307/мкл). Стимулированные ЛПС и ГМ-КСФ моноциты экспрессировали уровни транскриптов мРНК СРБ (0,79± 0,73 раза), несколько ниже по сравнению с нестимулированными гепатоцитами клеточной линии HepG2 (1,0 ± 0,6 раза), но все же выявляемыми. Способность моноцитов транспортировать pCRP в кровотоке, а происходящие из моноцитов экзосомы — передавать mCRP, может способствовать поддержанию хронического воспаления при ИБС.

Ключевые слова:

хроническое воспаление; ишемическая болезнь сердца; экзосомы; микрочастицы; моноциты; мономерная форма С-реактивного белка; пентамерная форма С-реактивного белка.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Спонсоры не участвовали в разработке исследования; при сборе, анализе или интерпретации данных; в написании рукописи или в решении опубликовать результаты.

Цифры

Рисунок 1

Ввод ячеек на…

Рисунок 1

Гейтирование клеток на диаграммах проточной цитометрии. ( и )…

фигура 1

Гейтирование клеток на диаграммах проточной цитометрии. ( a ) гейтирование CD235a-PE-Cy7-положительных событий (эритроциты), гейт R1; ( b ) гейтирование CD41-APC-положительных событий (тромбоциты), гейт R2; ( c ) гейтирование CD45-PerCP-Cy5.5-положительных событий (лейкоциты), ворота R3. SSC-H — боковое рассеяние.

Рисунок 2

Обнаружение СРБ на CD45-положительных лейкоцитах…

Рисунок 2

Обнаружение СРБ на CD45-положительных лейкоцитах. ( a ) Связывание неспецифического…

фигура 2

Обнаружение СРБ на CD45-положительных лейкоцитах. ( a ) Связывание неспецифического FITC-меченого мышиного IgG с CD45-позитивными лейкоцитами; ( b ) связывание меченого FITC моноклонального антитела к pCRP с CD45-положительными лейкоцитами. pCRP – пентамерный С-реактивный белок.

Рисунок 3

Диаграммы проточной цитометрии всего…

Рисунок 3

Диаграммы проточной цитометрии образцов цельной крови после лизиса эритроцитов. ( и )…

Рисунок 3

Диаграммы проточной цитометрии образцов цельной крови после лизиса эритроцитов. ( a ) CD45-положительные клетки (лейкоциты), отобранные с помощью прямоугольных ворот; ( b ) mCRP-положительные лейкоциты; ( c ) CD14-положительные лейкоциты (моноциты), отобранные с помощью прямоугольных ворот; ( d ) mCRP и pCRP-положительные моноциты. pCRP – пентамерный С-реактивный белок; мСРБ – мономерный С-реактивный белок; SSC-H — боковое рассеяние.

Рисунок 4

Обнаружение СРБ на CD45/CD14-положительных моноцитах…

Рисунок 4

Обнаружение СРБ на CD45/CD14-положительных моноцитах. ( a ) Связывание неспецифического…

Рисунок 4

Обнаружение СРБ на CD45/CD14-положительных моноцитах. ( a ) Связывание неспецифического меченного FITC мышиного IgG с CD14-позитивными моноцитами; ( b ) связывание меченого FITC моноклонального антитела к pCRP с CD14-положительными моноцитами. pCRP – пентамерный С-реактивный белок.

Рисунок 5

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (RT-PCR)…

Рисунок 5

Результаты полимеразной цепной реакции в реальном времени (RT-PCR) относительной экспрессии CRP. СРБ — С-реактивный…

Рисунок 5

Результаты полимеразной цепной реакции в реальном времени (RT-PCR) относительной экспрессии CRP. СРБ — С-реактивный белок. HepG2 — клеточная линия гепатоцеллюлярной карциномы человека. HepG2-IL6 — клетки HepG2, стимулированные интерлейкином-6. ГМ-КСФ, ЛПС-стимулированные моноциты — гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор и липополисахарид-стимулированные моноциты периферической крови. Экспрессию CRP нормализовали относительно экспрессии мРНК β-актина. Данные выражены как значения относительно группы HepG2. Столбики погрешностей представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение.

Рисунок 6

Электрофореграмма фрагментов ПЦР в…

Рисунок 6

Электрофореграмма фрагментов ПЦР в 1,5% агарозном геле в буфере трис-ацетат-ЭДТА. Шкала…

Рисунок 6

Электрофореграмма фрагментов ПЦР в 1,5% агарозном геле в буфере трис-ацетат-ЭДТА. Шкала слева: соответствующее количество пар оснований. Экспрессия СРБ обнаружена в: HepG2 – линии клеток гепатоцеллюлярной карциномы человека; HepG2-IL6 – интерлейкин-6-стимулированные клетки HepG2; ГМ-КСФ, ЛПС-стимулированные моноциты — гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор и липополисахарид-стимулированные моноциты периферической крови; п.н. – пары оснований.

См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC

Цитируется

Мономерный С-реактивный белок: текущие перспективы использования и включения в качестве прогностического индикатора и терапевтической цели.
Слевин М., Хейдари Н., Азамфирей Л.
Слевин М. и соавт.
Фронт Иммунол. 2022 4 марта; 13:866379. doi: 10.3389/fimmu.2022.866379. Электронная коллекция 2022.
Фронт Иммунол. 2022.
PMID: 35309334
Бесплатная статья ЧВК.
Обзор.
Мономерный CRP усугубляет повреждение миокарда после инфаркта миокарда путем поляризации макрофагов до провоспалительного фенотипа через сигнальный путь JNK.
Zha Z, Cheng Y, Cao L, Qian Y, Liu X, Guo Y, Wang J.
Жа З и др.
Дж. Инфламм Рез. 2021 18 декабря; 14: 7053-7064. doi: 10.2147/JIR.S316816. Электронная коллекция 2021.
Дж. Инфламм Рез. 2021.
PMID: 34984018
Бесплатная статья ЧВК.
Ширина распределения моноцитов как новый показатель сепсиса у пациентов с COVID-19.
Алсувайди Л., Аль Хейали С., Шейх Н., Аль Наджар Ф., Селием Р., Хан А., Хашим М.
Алсувайди Л. и соавт.
BMC Infect Dis. 2022 4 января; 22 (1): 27. дои: 10.1186/s12879-021-07016-4.
BMC Infect Dis. 2022.
PMID: 34983404
Бесплатная статья ЧВК.
Экзосомы: потенциальный игрок в эндотелиальной дисфункции при сердечно-сосудистых заболеваниях.
Никдуст Ф., Пазоки М., Мохаммадтагизаде М. , Агаали М.К., Амровани М.
Никдуст Ф. и др.
Сердечно-сосудистый токсикол. 2022 март; 22(3):225-235. doi: 10.1007/s12012-021-09700-y. Epub 2021 20 октября.
Сердечно-сосудистый токсикол. 2022.
PMID: 34669097
Бесплатная статья ЧВК.
Обзор.
Защита антителами от долговременной потери памяти, индуцированной мономерным С-реактивным белком, в мышиной модели деменции.
Гарсия-Лара Э., Агирре С., Клотет Н., Савкулич Х., Бартра С., Альменара-Фуэнтес Л., Суньол С., Корпас Р., Олах П., Трипон Ф., Краучук А., Слевин М., Санфелиу К.
Гарсия-Лара Э. и др.
Биомедицины. 2021 16 июля; 9 (7): 828. doi: 10.3390/биомедицина
28.
Биомедицины. 2021.
PMID: 34356892
Бесплатная статья ЧВК.

Просмотреть все статьи «Цитируется по»

использованная литература

1. Эйзенхардт С. У., Тиле Дж.Р., Баннаш Х., Старк Г.Б., Питер К. С-реактивный белок: как конформационные изменения влияют на воспалительные свойства. Клеточный цикл. 2009; 8: 3885–3892. doi: 10.4161/cc.8.23.10068.
  —
  DOI
  —
  пабмед
1. Ву Ю., Потемпа Л.А., Эль Кебир Д., Филеп Дж.Г. С-реактивный белок и воспаление: конформационные изменения влияют на функцию. биол. хим. 2015; 396:1181–1197. doi: 10.1515/hsz-2015-0149.
  —
  DOI
  —
  пабмед
1. Тиле Дж. Р., Зеллер Дж., Баннаш Х., Старк Г.Б., Питер К., Эйзенхардт С.Ю. Ориентация на С-реактивный белок при воспалительных заболеваниях путем предотвращения конформационных изменений. Медиат. Воспаление. 2015;2015:372432. дои: 10.1155/2015/372432.
  —
  DOI
  —
  ЧВК
  —
  пабмед
1. Ji S.R., Wu Y., Zhu L., Potempa L.A., Sheng F.L., Lu W., Zhao J. Клеточные мембраны и липосомы диссоциируют C-реактивный белок (CRP) с образованием нового биологически активного структурного промежуточного продукта: mCRP(m) FASEB J. 2007; 21: 284–294. doi: 10.1096/fj.06-6722com.
  —
  DOI
  —
  пабмед
1. Хрейсс Т., Йожеф Л., Потемпа Л.А., Филеп Ю.Г. Противоположные эффекты форм С-реактивного белка на индуцированную сдвигом адгезию нейтрофилов к тромбоцитам и агрегацию нейтрофилов в цельной крови. Тираж. 2004; 110:2713–2720. doi: 10.1161/01.CIR.0000146846.00816.DD.
  —
  DOI
  —
  пабмед

Грантовая поддержка

№ 16-15-10098/Российский научный фонд

Экстракты аллергенов и рекомбинантные белки: сравнение эффективности диагностики аллергии in vitro методом мультиплексного анализа на биологическом микрочипе | Аллергия, астма и клиническая иммунология

Исследования
Открытый доступ
Опубликовано: 13 марта 2016 г.

Olga Smoldovskaya ¹ ,
Guzel Feyzkhanova ¹ ,
Alla Arefieva ¹ ,
Sergei Voloshin ¹ ,
Olga Ivashkina ¹ ,
Yuriy Reznikov ¹ &
…
Алла Рубина ¹

Аллергия, астма и клиническая иммунология
том 12 , номер статьи: 9 (2016)
Процитировать эту статью

Abstract

Background

Иммунологические тест-системы для диагностики гиперчувствительности I типа включают следующие типы антигенов: цельные экстракты аллергенов, отдельные высокоочищенные белки и их рекомбинантные аналоги. Целью данного исследования было сравнение результатов, полученных с экстрактами целых аллергенов (пыльца березы, кошачья перхоть и пыльца тимофеевки) и их соответствующими рекомбинантными белками в иммуноанализе на основе биочипов.

Методы

Проведен мультиплексный флюоресцентный иммуноанализ образцов сыворотки крови 139 пациентов с использованием биологических микрочипов (биочип). Были измерены концентрации sIgE для выбранных аллергенов и их рекомбинантных компонентов. ROC-анализ использовали для сравнения результатов и определения точности диагностики.

Результаты

Результаты для экстракта пыльцы березы и его рекомбинантных аллергенов показали, что диагностическая точность методов, использующих экстракт цельного аллергена, его основной компонент Bet v 1 и комбинацию основных и второстепенных компонентов (Bet v 1 и Ставка v 2) была такой же. Значения диагностической точности для экстракта перхоти кошки и его основного рекомбинантного компонента Fel d 1 были одинаковыми. В отличие от аллергенов пыльцы березы и перхоти кошек, использование рекомбинантных компонентов пыльцы тимофеевки травяной (Phl p 1, Phl p 5, Phl p 7 и Phl p 12) не позволило достичь диагностической точности использования природного экстракта.

Выводы

Мультиплексный анализ образцов, полученных от пациентов с аллергией на пыльцу березы и кошачью перхоть, с использованием биологических микрочипов показал, что сравнимая точность наблюдается для анализа с природными экстрактами и рекомбинантными аллергенами. В случае аллергена тимофеевки использование рекомбинантных компонентов может оказаться недостаточным.

История вопроса

Иммунологические тест-системы для диагностики гиперчувствительности I типа в настоящее время включают экстракты целых аллергенов, высокоочищенные аллергены из экстрактов и их рекомбинантные аналоги, полученные методами генной инженерии. В большинстве тест-систем используются экстракты и смеси аллергенов.

Экстракты представляют собой гетерогенные белковые смеси, выделенные из природных материалов, содержащих аллергенные и неаллергенные материалы. Они позволяют оценить реактивность сыворотки крови пациента по отношению ко всем потенциально аллергенным компонентам. Кроме того, экстракты аллергенов содержат как видоспецифичные белки, так и компоненты с эпитопами, демонстрирующими высокую перекрестную реактивность с белками другого происхождения. Это затрудняет идентификацию первичного источника аллергии [1]. Кроме того, стандартизация состава экстрактов является еще одной прикладной проблемой. В ряде исследований показано, что экстракты аллергенов, выпускаемые рядом производителей, существенно различаются по составу и активности [2, 3], что приводит к расхождению результатов анализа в разных тест-системах [4].

Диагностика аллергии in vitro с использованием стандартизированных рекомбинантных аллергенов и высокоочищенных компонентов экстрактов аллергенов позволяет получать более воспроизводимые результаты. Следует отметить, что современное количество рекомбинантных аллергенов не покрывает весь спектр потенциально аллергенных белков, присутствующих в экстрактах. Поэтому использование только отдельных белковых компонентов для выявления источника аллергии не рекомендуется, так как это может дать ложноотрицательный результат в случае иммунного ответа на белок, не входящий в этот диапазон. Поэтому диагностика аллергии чаще всего проводится с учетом анамнеза, результатов кожных проб и/или измерения sIgE к экстрактам аллергенов, тогда как молекулярная диагностика аллергии с использованием отдельных компонентов аллергена применяется у полисенсибилизированных пациентов [5, 6] с целью выявить основной сенсибилизирующий компонент, например, для последующей аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ) [7, 8], а также для прогнозирования и контроля эффективности лечения [9].].

В ряде случаев показано, что анализ с рекомбинантными аллергенами повышает точность диагностики [10, 11]. В настоящее время наиболее широко используемой тест-системой, основанной только на рекомбинантных аллергенах, является ImmunoCAP ISAC ^® производства Phadia (в настоящее время торговая марка Thermo Fischer Scientific Inc. ).

Хотя отдельные белки аллергенов использовались в исследованиях эффективности диагностики с рекомбинантными аллергенами с 1990-х годов [12], имеется несколько примеров одновременного мультиплексного анализа sIgE как к экстрактам цельных аллергенов, так и к их рекомбинантным белкам. Представляется, что биологический микрочип является наиболее удобным инструментом для одновременного анализа sIgE к обеим отдельным молекулам цельных экстрактов аллергенов в одном образце сыворотки в ходе одного анализа. Целью данной работы было сравнение диагностической точности метода выявления гиперчувствительности I типа с использованием цельных аллергенных экстрактов пыльцы березы, кошачьей перхоти и пыльцы тимофеевки (диагностически значимых в средней полосе России) и соответствующих им рекомбинантных белков на биологических микрочипах. . Сравнение точности диагностики было выполнено с использованием анализа рабочей кривой приемника (ROC).

Методы

Пациенты

Исследование проведено с использованием образцов сыворотки крови пациентов, предоставленных ФГБУ «Поликлиника № 1 Управления делами Президента Российской Федерации». Первичный отбор пациентов основывался на наличии в анамнезе симптомов аллергии: сезонного аллергического ринита в ранневесенний или летний период, а также круглогодичного ремиссивного ринита в уличных условиях.

Для исследования были выбраны сыворотки пациентов с положительным кожным прик-тестом (КПТ) (реакция >2 мм в диаметре волдырей по крайней мере на один из экстрактов: пыльцу березы, пыльцу тимофеевки или кошачью перхоть). Сыворотки пациентов с положительным КПТ на аллерген были одобрены как положительные на этот аллерген. Сыворотки пациентов с отрицательным результатом КПТ на аллерген (реакция <2 мм в диаметре) были одобрены как отрицательные на этот аллерген. КПТ проводили с использованием солевых водных экстрактов, 0,1% дигидрохлорида гистамина в качестве положительного контроля и NaCl 0,9.% в качестве отрицательного контроля.

Всего были отобраны сыворотки от 139 больных, из них 56, 73 и 33 были сенсибилизированы к пыльце березы, кошачьей перхоти и пыльце тимофеевки травяной соответственно. Данные сывороток больных анализировали анонимно.

Анализ сывороток крови на биочипах

Сыворотки крови больных анализировали методом мультиплексного флюоресцентного иммуноанализа на биологических микрочипах/биочипах (ЭИМБ РАН). ранее [13, 14]. Биочип представлял собой набор полусферических гидрогелевых элементов объемом 0,1 нл, содержащих следующие иммобилизованные антигены: пыльца березы, рекомбинантные аллергены пыльцы березы – Bet v 1 и Bet v 2; кошачья перхоть, рекомбинантный аллерген кошачьей перхоти – Fel d 1; пыльца тимофеевки травы, рекомбинантные аллергены пыльцы тимофеевки травы – Phl p 1, Phl p 5, Phl p 7 и Phl p 12 (рис. 1).

Анализ на основе биочипа позволяет анализировать sIgE в диапазоне от 0,15 до 100 МЕ/мл [12]. Мы использовали концентрацию 0,35 МЕ/мл в качестве порога для различения положительных и отрицательных результатов в соответствии с рекомендацией ВОЗ.

Статистический анализ

ROC-анализ был проведен для оценки диагностической точности использования экстрактов аллергенов и их рекомбинантных белков. ROC-кривые строили и вычисляли площади под кривой (AUC) с помощью программы MedCalc версии 15.2.2 [15, 16]. При построении ROC-кривых для смеси рекомбинантных белков результат считали положительным, если не менее один из белков показал положительный сигнал для выбранного порога отсечки.

Результаты и обсуждение

В этом исследовании мы проанализировали 139 образцов сыворотки крови пациентов с аллергией на пыльцу березы (56 случаев), кошачью перхоть (73 случая) или пыльцу тимофеевки травы (33 случая). Эти аллергены наиболее распространены и диагностически значимы в средней полосе России. Для каждого аллергена определяли уровень sIgE к природным экстрактам и их рекомбинантным белкам: Bet v 1, Bet v 2, Phl p 1, Phl p 5, Phl p 7, Phl p 12, Fel d 1. Рис. 1 представлена структура биочипа (а) и пример флуоресцентного изображения после иммуноанализа (б) Данные проанализированы с помощью ROC-анализа. Результаты представлены в таблице 1 и на рис. 2. Статистический анализ результатов диагностической точности использования экстракта натуральной пыльцы березы и его рекомбинантных компонентов показал, что AUC составила 0,9. 5 как для экстракта, так и для его основного рекомбинантного белка Bet v 1 или 0,83 для минорного компонента профилина Bet v 2. Для комбинации Bet v 1 + Bet v 2 AUC была одинаковой и равнялась 0,95.

Рис. 1

а Схема расположения иммобилизованных экстрактов аллергенов, их рекомбинантных белков и маркерных пятен (М) на биологических микрочипах. Каждый антиген иммобилизовали в четырех повторностях. Неспецифическое связывание контролировали с помощью пятен, не содержащих белков (пустой гель). б Пример флуоресцентного изображения биочипа после иммуноанализа образца сыворотки крови больного с аллергией на пыльцу березы и кошачью шерсть

Изображение в натуральную величину

гиперчувствительность с использованием экстрактов аллергенов, рекомбинантных компонентов и групп рекомбинантных компонентов

Полноразмерная таблица

Рис. 2

Сравнение ROC-кривых для методов выявления гиперчувствительности I типа с использованием экстрактов аллергенов, рекомбинантных компонентов и комбинаций рекомбинантных компонентов. а 1-Бет в 1, 2-Бет в 2, 3-Бет в 1 и Бет в 2, 4 — экстракт пыльцы березы. b 1-Fel d 1, 2 — экстракт перхоти кошки и Fel d 1, 3 — экстракт перхоти кошки. c 1-Phl p 1, 2-Phl p 5, 3-Phl p 7, 4-Phl p 12, 5-Phl p 1, Phl p 5, Phl p 7, Phl p 12, 6- пыльца тимофеевки травы экстракт

Увеличенное изображение

Анализ диагностической точности использования аллергена перхоти кошки показал, что AUC как для экстракта, так и для рекомбинантного Fel d 1 была одинаковой и равнялась 0,76.

Результаты, полученные для аллергенов березы и кошки, согласуются с имеющимися в литературе данными о частоте возникновения иммунного ответа на различные аллергенные компоненты. Сенсибилизация к Bet v 1 как к основному аллергену возникает у значительной части пациентов с аллергией на пыльцу березы (60–90 %) [17], тогда как к другим рекомбинантным компонентам сенсибилизация наблюдается лишь у 12 % пациентов (Bet v 2, Бет v 4, Бет v 6, Бет v 8 и т. д.) [18]. По разным оценкам, сенсибилизация к Fel d 1 происходит в 80–9 лет.5 % пациентов с повышенной чувствительностью к перхоти кошек, что обуславливает высокую эффективность диагностического теста с использованием этого рекомбинантного белка. Из полученных данных можно предположить, что в диагностических целях экстракты аллергенов могут быть заменены комбинацией соответствующих рекомбинантных компонентов в случае пыльцы березы или мажорным рекомбинантным белком Fel d 1 в случае перхоти кошек. Однако следует отметить, что в этом случае могут быть получены как ложноположительные, так и ложноотрицательные результаты. Например, взаимодействие аллергена Fel d 1 с IgE, специфичным к собачьей перхоти [19] наблюдается у 25 % пациентов с аллергией на собачью шерсть. С другой стороны, у пациента может проявляться сенсибилизация к второстепенным компонентам аллергена, которая встречается только в цельных экстрактах аллергенов. В этих случаях использование только рекомбинантных аллергенов может давать ложноотрицательные результаты.

Для оценки диагностической точности анализа при аллергии на тимофеевку использовали натуральный экстракт и четыре разных рекомбинантных белка: Phl p 1, Phl p 5 и Phl p 7, Phl p 12. Полученные данные показывают, что AUC для экстракта – 0,83, для Фл р 1 и комбинации Фл р 1 и Фл р 5 – 0,71, тогда как для Фл р 5, Фл р 7 и Фл р 12 AUC варьировала в пределах 0,65–0,66. AUC составляла 0,74 для комбинации 4 рекомбинантных компонентов.

Phl p 1 и Phl p 5 считаются основными компонентами пыльцы тимофеевки травы. По литературным данным, Phl p 1 участвует в процессе сенсибилизации более чем у 90 % пациентов с аллергией на тимофеевку [20, 21], поэтому sIgE к Phl p 1 является достаточным для диагностики аллергии на пыльцу тимофеевки у населения Центральной Европы. [22]. Однако, по нашим данным, точность использования этого рекомбинантного компонента ниже, чем при использовании экстракта. Добавление основного компонента Phl p 5, который встречается у 80 % пациентов, сенсибилизированных пыльцой тимофеевки, не увеличивает значение AUC.

Эффективность диагностики с использованием только минорных перекрестно-реактивных компонентов кальций-связывающего белка Phl p 7 и профилина Phl p 12 довольно низкая, но их включение в анализ наряду с мажорными белками улучшает AUC с 0,71 до 0,74. Таким образом, можно сделать вывод, что, в отличие от ситуаций с аллергенами березы и кошки, использование доступных рекомбинантных белков к пыльце тимофеевки не позволяет достичь диагностической точности для природного экстракта.

В настоящей работе в качестве исследовательского инструмента для сравнения диагностических подходов на основе натуральных экстрактов и их рекомбинантных компонентов использовались биочипы. Кроме того, после модификации и валидации биочипы могут оказаться практически значимым методом, сочетающим подходы второй и третьей линии диагностики аллергии.

Выводы

Мультиплексный анализ образцов сывороток, полученных от больных аллергией на березовую и кошачью перхоть, проведенный на биологических микрочипах, показал, что использование рекомбинантных аллергенов дает точность, сравнимую с натуральными экстрактами. В случае тимофеевки использование рекомбинантных компонентов может оказаться недостаточным для идентификации источника аллергии. В ряде случаев предпочтителен одновременный анализ как экстрактов, так и их отдельных белковых компонентов. Этот подход может быть эффективно реализован с помощью технологии белковых биочипов.

Сокращения

SIGE:: специфический иммуноглобулин Е
РПЦ:: кривая работы приемника
АУК:: площадь под кривой
АСИТ:: аллергенспецифическая иммунотерапия
SPT:: кожный прик-тест

Ссылки

«>
Treudler R, Simon JC. Обзор компонентной диагностики. Curr Allergy Asthma Rep. 2013;13(1):110–7.
Артикул
КАС
пабмед
Google ученый
Ларенас-Линнеманн Д., Круз А.А., Гутьеррес И.Р., Родригес П., Шах-Хоссейни К., Мишельс А. и др. Европейские и мексиканские диагностические экстракты бермудской травы и кошки в сравнении с американскими в кожных тестах. Энн Аллергия Астма Иммунол. 2011;106(5):421–8.
Артикул
пабмед
Google ученый
Кассет А, Валента Р, Вртала С. Содержание аллергенов и аллергенная активность экстрактов клещей домашней пыли in vivo. Int Arch Allergy Immunol. 2013; 161: 287–8.
Артикул
пабмед
ПабМед Центральный
Google ученый
Вуд Р.А., Сегал Н., Алстедт С., Уильямс П.Б. Точность лабораторных результатов антител IgE. Энн Аллергия Астма Иммунол. 2007;99(1):34–41.
Артикул
пабмед
Google ученый
Canonica GW, Ansotegui IJ, Pawankar R, Schmid-Grendelmeier P, van Hage M, Baena-Cagnani CE, et al. Консенсусный документ WAO-ARIA-GA²LEN по молекулярной диагностике аллергии. World Allergy Organ J. 2013;6(1):17.
Артикул
пабмед
ПабМед Центральный
Google ученый
Macchia D, Melioli G, Pravettoni V, Nucera E, Piantanida M, Caminati M, et al. Руководство по использованию и интерпретации диагностических методов при пищевой аллергии у взрослых. Клин Мол Аллергия. 2015;5(13):27.
Артикул
Google ученый
Валента Р., Кампана Р., Март К., ван Хаге М. Аллергенспецифическая иммунотерапия: от терапевтических вакцин к профилактическим подходам. J Интерн Мед. 2012;272(2):144–57.
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google ученый
Март К., Фокке-Тейкл М., Лупинек С., Валента Р., Нидербергер В. Пептиды аллергенов, рекомбинантные аллергены и гипоаллергены для аллергенспецифической иммунотерапии. Варианты лечения аллергии Curr. 2014;1:91–106.
Артикул
пабмед
ПабМед Центральный
Google ученый
Marcucci F, Sensi L, Incorvaia C, Dell’Albani I, Di Cara G, Frati F. Специфический ответ IgE на различные компоненты аллергенов пыльцы трав у детей, проходящих сублингвальную иммунотерапию. Клин Мол Аллергия. 2012;10(1):7.
Артикул
КАС
пабмед
ПабМед Центральный
Google ученый
Маруяма Н., Накагава Т., Ито К., Кабанос С., Боррес М.П., Моверар Р., Танака А., Сато С., Эбисава М. Измерение специфических антител IgE к Ses i 1 улучшает диагностику аллергии на кунжут. Клин Эксперт Аллергия. 2016;46(1):163–71.
Артикул
КАС
пабмед
Google ученый
Caballero ML, Umpierrez A, Perez-Piñar T, Moneo I, de Burgos C, Asturias JA, Rodríguez-Pérez R. Рекомбинантные аллергены Anisakis simplex повышают специфичность диагностики, сохраняя высокую чувствительность. Int Arch Allergy Immunol. 2012;158(3):232–40.
Артикул
КАС
пабмед
Google ученый
Лаффер С., Шпицауэр С., Сусани М., Парлейтнер Х., Швайгер С., Грёнлунд Х., Менц Г., Паули Г., Исии Т., Нолте Х., Эбнер С., Сехон А.Х., Крафт Д., Эйхлер Х.Г., Валента Р. Сравнение рекомбинантных аллергенов пыльцы тимофеевки травы с натуральным экстрактом для диагностики аллергии на пыльцу злаков в различных популяциях. J Allergy ClinImmunol. 1996; 98 (3): 652–8.
Артикул
КАС
Google ученый
Рубина А.Ю., Колчинский А.Ю., Макаров А.А., Заседателев А.С. Почему 3D? Гелевые микрочипы в протеомике. Протеомика. 2008;8(4):817–31.
Артикул
КАС
пабмед
Google ученый
Фейзханова Г.У., Филиппова М.А., Талыбов В.О., Дементьева Е.И., Масленников В.В., Резников Ю.П., и др. Разработка гидрогелевого биочипа для диагностики аллергии in vitro. Дж Иммунол Методы. 2014; 406:51–7.
Артикул
КАС
пабмед
Google ученый
Фосетт Т. Введение в ROC-анализ. Распознавание образов. 2006; 27:861–74.
Артикул
Google ученый
Эусеби П. Меры точности диагностики. Цереброваскулярная дис. 2013;36(4):267–72.
Артикул
пабмед
Google ученый
«>
Секеркова А., Полачкова М. Обнаружение Bet v 1, Bet v 2 и Bet v 4 специфических IgE-антител в сыворотке крови детей и взрослых пациентов с аллергией на пыльцу березы: оценка различных профилей IgE-реактивности в зависимости от возраста и региона сенсибилизация. Int Arch Allergy Immunol. 2011;154(4):278–85.
Артикул
пабмед
Google ученый
Росси Р.Э., Монастероло Г., Монастероло С. Обнаружение специфических антител IgE в сыворотке пациентов с аллергией на пыльцу березы с использованием рекомбинантных аллергенов Bet v 1, Bet v 2, Bet v 4: оценка различных профилей реактивности IgE. Аллергия. 2003;58(9):929–32.
Артикул
КАС
пабмед
Google ученый
Грёнлунд Х., Саарне Т., Гафвелин Г., ван Хаге М. Основной кошачий аллерген, Fel d 1, в диагностике и терапии. Int Arch Allergy Immunol. 2010;151(4):265–74.
Артикул
пабмед
Google ученый
«>
Секеркова А., Полацкова М., Стриз И. Обнаружение специфических IgE-антител к Phl p 1, Phl p 5, Phl p 7 и Phl p 12 в сыворотках крови детей и взрослых пациентов с аллергией на пыльцу Phleum. Аллергол Интерн. 2012;61(2):339–46.
Артикул
КАС
пабмед
Google ученый
Росси Р.Э., Монастероло Г., Монастероло С. Измерение IgE-антител против очищенных аллергенов пыльцы трав (Phl p 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 11 и 12) в сыворотке пациентов с аллергией на пыльца трав. Аллергия. 2001;56(12):1180–5.
Артикул
КАС
пабмед
Google ученый
Боканович Д., Аберер В., Хеммер В., Хайнеманн А., Комерики П., Шеффель Дж., Штурм Г.Дж. Определение sIgE к rPhl p 1 достаточно для диагностики аллергии на пыльцу трав. Аллергия. 2013;68(11):1403–9.
Артикул
КАС
пабмед
Google ученый

Ссылки на скачивание

Вклад авторов

OS, GF и AR участвовали в разработке экспериментов; Ю. Р. участвовал в сборе клинического биоматериала и его первичной характеристике; AA, SV, OI и GF участвовали в проведении анализа и сборе данных; AR, OS и GF внесли свой вклад в интерпретацию данных; А.А. и О.С. внесли свой вклад в подготовку рукописи; SV участвовал в художественных работах и иллюстрациях; AR и GF внесли свой вклад в пересмотр рукописи; YR критически рассмотрел рукопись. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Благодарности

Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 14-50-00060.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Сведения об авторе

Авторы и организации

Институт молекулярной биологии им. Энгельгардта Российской академии наук (ИМБ РАН), 119991, ул. Сергей Волошин, Ольга Ивашкина, Юрий Резников и Алла Рубина

Авторы

Ольга Смолдовская
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar
Гузель Фейзханова
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar
Алла Арефьева
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Академия
Сергей Волошин
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar
Ольга Ивашкина
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar
Юрий Резников
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar
Алла Рубина
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в
PubMed Google Scholar

Автор, ответственный за корреспонденцию

Алла Рубина.