Стойкая крем-краска для волос MATRIX Socolor.beauty — «Краска мягкая. Не жжёт. Цвет соответствует. Отзыв дополняю. Ещё лучше, ещё более щадяще.»

Ну вот красавицы блондинки, настала моя очередь, рассказать о моих мытарствах)

Когда-то давненько, я была блондинкой. Осветляла свои волосы, не смотря на светлую базу, порошком от blondex. Знаете, такие в синей коробочке продаются? Осветлялось классно. Тонировала разведённым многократно тоником. Ни кто не подсказывал, что надо тонировать, просто сама так поняла? почувствовала? И всё бы ничего, но в какой-то момент, поняла, что хочу перемен. Ну мы девочки все это обожаем. Эксперименты, просто заводят нас) Ещё почувствовала, что на затылке, кожа, или корни волос, стало как-то … дискомфортно то ли? То чешется, ни с того, ни с сего. То «тянет», а то и «дыбом встают» волосы именно кусочком примерно 3Х3 см. Сожгла, или накопилось, не знаю. Но пудра, есть пудра. После этого, время от времени, любые манипуяции, будь то окрашивание, или даже маски-лечение, вызвать могут дискомфорт в этом месте. Ну это я отвлеклась-увлеклась. И так.

Когда-то любимый мною цвет)

Я перешла в стан златовласок на добрых 8 лет.И вот, опять же торкнуло))) Хочу быть блондикою холодною! Свои волосы, как я уже говорила, достаточно светлые. Чуть ниже 9 го уровня, но больше 8 го. Это как? ) С холодным пепельным подтоном светло-русые.

Выходила с золота, сама. Ну есть у меня, печальный и не однократный опыт «мастеров» и «колористов». Мне одной так не везло?)

Опытным путём, но с сохранением длины и главное качества шевелюры, я вышла-таки в блонд. Была горда, когда через одного (ну капельку преувеличиваю), меня спрашивали чем я окрашиваюсь. И в проф.магазине для парикмахерских, в том числе!

Но на волосах, были разные краски. Именно проф. я доверялась лишь им. Поэтому цвет был чёткий, нужный. Но каждый раз, головная боль, чем опять окрашивать корни. Я поняла что отменный результат, даёт краска эстель sos, но, жутко жжёт и к сожалению ломает волос. Капус, ммм, он мягкий и мне подошёл, но, опять это «но». Пепла в нём мало. Практически нет. Когда окрашивалась в золото, эта краска была идеальна для меня. Матрикс ультра-блонд, не дурно-не дурно. Но не поверите) Жгёт и еле терплю после нанесения первые 10 минут. Фармавита? Я и раньше не доверяла безаммиачным, но здесь подкупило, что аммиак есть (да-да, я вот так по доброму к аммиаку). Пониженное содержание, не давало лишь мерзкого запаха (аммиаку лишь с этим не повезло и только!). Но, цвет опять не тот, и волос, через некоторое время, просто как-то, иссушался что ли и ломался, опять же, ломался. Игора, замечательные оттенки давала на мне. Но, краска жестока, и оттенок 10.2, куда-то пропал из продажи. Его даже невозможно было заказать. Естественно, я добавляла всевозможные проф.ампулы, читала на айрекоменде, невероятное количество отзывов. Просмотрела кучу видео на ютьюб, общалась напрямую в скайпе с мастерами-колористами. Мне думается, пора просто отправляться за получением корочки, о колористике) Без всякой учёбы.

Всё. Терпение лопнуло. Пошла в большой и любимый у нас, магазин по проф.штучкам, купила матрикс 11А. Ну и окислитель капус 9%. Почему капус? Потому что не вижу разницы между фирмами в «гидроперите». Капус и цена подходит и, что немаловажно, он мягкий с приятным ароматом.

И так, выждав время до отрастания корней, я приступила.

Корни до окрашивани

Смешала половину тюбика — 45 гр. краски, добавила 1 см. корректора от эстель 0/66 фиолетовый, активатор капус 9% 50 мл.

Выдавила половину тюбика краски матрикс 11А

Здесь добавила 1 см. корректора эстель 0/66

Краска легко смешивается с окислителем

По началу нанесения, думала не хватит. Потому как я не наношу, а накладываю) густо. Но краски хватило с лихвой. Краска размешивается на раз,быстро, удобно. Запах есть, но не «вырви-глаз». Нанесла не сказать чтоб быстро, но и не долго. Рука набита, ой-ёй-ёй. Выдержала 45 минут. С эмульгировала. Я эмульгирую не всегда, через раз наверное. Волосы берегу, им и так досталось. Смыла проф.шамунем от эстель. И нанесла бальзам для холодного блонда, тоже эстель-отиум.

Волосы после окрашивания, ещё влажные

Сухие волосы после окрашивания

Это фото передаёт реальнее всего получившийся цвет

Парочка которой я воспользовалась при смывании краски

Результат нравится, это раз. Волосы не лезут, это два. Кожу не печёт, не стягивает, это три. Ну а дальше, по состоянию волос посмотрю. Думается мне, я на этой краске и угомонюсь.

_______________________________________

Ну вот, решила дополнить и рассказать, как ещё лучше я окрасила волосы.

Решив ещё более минимизировать вред от окрашивания (а он есть всегда, кто-бы что-бы не рассказывал)я перешла в матрикс на 10 тон. Помня о том, что колористы один цвет не любят использовать, а смешивают несколько тонов или оттенков, поняла что надо самой снова вернуться к смешиванию. Заказала с сайта [ссылка] свою краску.

Два тюбика тона 10AV, и по одному 10SP, 10P. Решив, что использовать 10AV буду большее количество. То есть, 10 тон — пепельно-перламутровый, 10 тон — серебристо-жемчужный, 10 тон — жемчужный

Планировала смешивать так: 15 грамм 10AV, и по 7-8 грамм 10P и 10SP. Но перепутала и получились, что взяла 15 грамм 10P и по 7-8 грамм 10AV и 10SP.

Забыла сказать, поговорив с консультантом, я узнала, что фиолетовый корректор, смываясь даёт желтинку. И это правда. По её совету, взяла корректор игора 0/11 антижёлтый. За что премного благодарна грамотной, в этом вопросе, девушке.

Корректора добавила в предыдущее окрашивание 1 см. А в этот раз 3 см. С того раза, смывалось аккуратно естественно без желтизны. Просто и-де-аль-но!

Фотографию до окрашивания, делать уже не стала и так всё понятно по предыдущей фотке. К краске добавила ампулу от Salerm — GRAY COVER.

Краску нанесла на корни, по всей длине волос, заранее распределила немного масла авокадо. Выдержала 45 минут и смыла. Не эмульгировала.

На мой взгляд, это мой, идеальный цвет. Без всяких розовинок и сиреневости. Как я и хотела, совершенный холодный в меру пепельный оттенок.

Ощущения от краски на корнях суперское. Абсолютно не жгло, не щипало. В конце окрашивания, лишь почувствовало лёгкое тепло. Теперь я довольна. Буду ли рекомендовать? Конечно, всенепременно!

__________________________

Ну вот, пользовалась я краской матрикс с февраля по декабрь. Констатирую факт. Перешла на 8-9 уровень. Закупила я этой краски ещё на полгода окрашиваний (минимум), но…печальное «но». Буду раздавать. Мне ею больше нельзя. Сначало «терзали мутные сомнения» теперь убедилась на 99,9%, у меня конкретно лезут волосы от этой краски. Ещё и пообламывались многие от корешочков. Торчит по всей голове подшёрсток по 2-3 см. Печально. Либо вернусь к капус, для меня саММая мягкая, но у капус один существенный недостаток. Даже пепельные краски, дают золотинку. Ну микстоны никто не отменял. Либо буду пробовать индолу. Отзывов не так много, но описывают краску, как достаточно мягкую. У меня даже от эстель, такого не было. Вот уж и правда, лучшее — враг хорошего.

Рейтинг (топ) красок для волос: какая краска лучше для волос без аммиака

Окрашивание волос применяют как для смены имиджа, так и для закрашивания седины. Под воздействием красок волосы теряют природную силу, становятся тусклыми, ломкими и ослабленными. Чтобы избежать негативного воздействия химических составов на волосяные луковицы, необходимо из многообразия брендов и изготовителей выбрать краску, наносящую минимальный вред волосяным луковицам и коже головы. Рейтинг красок для волос поможет определиться с выбором.

Принцип воздействия краски на волосы

Чтобы окрашивание принесло ожидаемый результат, необходимо знать, как происходит процесс окрашивания на химическом уровне.

Предполагается, что краски без содержания аммиака более щадящие, но это не так. Если в составе отсутствует этот компонент, значит присутствуют другие жесткие вещества, необходимые для проникновения пигмента в структуру волос.

Волос состоит из слоев:

• Кутикула – чешуйчатый верхний слой. Обеспечивает волосам гладкость, здоровый блеск, защищает от повреждений и воздействия окружающей среды.
• Кортекс – средний слой из спиралевидных волокон, надежно соединенных друг с другом. Содержат меланин, отвечающий за цветовой пигмент.
• Внутренний слой – мозговое вещество, отвечающее за циркуляцию воздуха и процесс терморегуляции.

Процесс окрашивания воздействует на волосы следующим образом: аммиак в составе красящей смеси приподнимает чешуйки верхнего слоя, перекись водорода беспрепятственно проникает в клетки меланина, обесцвечивая их. Далее происходит замена одного пигмента на другой посредством красящего вещества.

Выбор аммиачной или безаммиачной краски зависит от индивидуальных убеждений. Но наличие в составе смягчающих компонентов (масла, экстракты) необходимо в обоих случаях.

Виды красок

Краски делятся на:

• бытовые (масс-маркет) – общедоступные красящие смеси для волос, продаются в супермаркетах и косметических магазинчиках;
• профессиональные – разработаны для использования в парикмахерских, продаются в специализированных магазинах для салонов красоты.

При производстве бытовой краски не учитывается исходный цвет локонов перед окрашиванием, их структура и состояние. В результате бытовая краска – это средний состав, не приспособленный к определенному типу волос. Чтобы результат был приближенным к изображению на упаковке, в составе содержится большое количество перекиси водорода и других химических веществ, повреждающих волосяные луковицы.

Для профессиональных красок окислитель приобретают отдельно в процентном соотношении, подходящем к определенному типу и исходному состоянию волос. Также с профессиональной краской можно приобрести и смешать концентрат цвета (микстон), чтобы ярче выразить цвет или избавиться от ненавистного оттенка. Таким образом, специализированная краска ориентирована на индивидуальный подход к окрашиванию.

В зависимости от химического состава делятся:

• Перманентная используется для стойкого окрашивания, в составе содержит аммиак и перекись. Маскирует седину. Не смывается в течение двух месяцев, но постоянное окрашивание волос этим видом красок отрицательно влияет на их здоровье. Для поддержания нормального состояния волос рекомендуется 2-3 раза в неделю использовать дополнительные средства ухода (маски, бальзамы).
• Полуперманентная с минимальной концентрацией аммиака, не содержит перекись. По своему воздействию более щадящая, чем первый вид, так как практически не проникает в чешуйки, окрашивая только верхний слой волоса. Такая краска не способна закрасить седые пряди. В основном используется для того, чтобы ярче выразить природный цвет волос или придать ему оттенок. Смывается достаточно быстро.
• Оттеночная в основном выпускается в виде шампуня-тоника. Оттеночное средство не содержит агрессивных веществ, быстро и легко смывается. Применяется в основном для экспресс-окраски. Более устойчивого цвета можно достигнуть регулярным использованием тонировочного шампуня.

Можно пользоваться народными средствами. Мытье головы отваром из трав, луковой шелухи, скорлупы грецких орехов способствует не только приданию оттенка волосам, но и их укреплению. Применение хны и басмы гарантирует стойкий и насыщенный цвет без вреда для волос.

Основные критерии выбора красящего состава

При окрашивании волос в салоне-парикмахерской краску для волос обычно подбирает специалист. Чтобы красить волосы в домашних условиях самостоятельно, необходимо правильно выбрать красящий состав, дабы избежать негативных последствий.

1. Стойкость. При использовании качественной краски интенсивность цвета не должна снижаться как минимум в течение четырех недель. Стойкость разделяется на уровни по номерам, которые можно увидеть на упаковке.

• первый уровень – это оттеночные шампуни;
• второй – бережные полуперманентные окрашивающие смеси;
• третий – самые стойкие перманентные краски.

2. Запах окрашивающей смеси не должен быть слишком едким. Это говорит о чрезмерном содержании химических веществ в составе, что навредит волосам. Пользоваться такой краской опасно для здоровья.
3. Соответствие цвета на упаковке с результатом окрашивания. Незначительные отличия в оттенке допустимы, так как финальный цвет зависит от исходного тона и структуры волос. Для наиболее естественного оттенка специалисты рекомендуют подбирать краску на один/два тона светлее или темнее природного цвета, чтобы она смогла его оттенить.
4. Содержание смягчающих компонентов в составе краски. Это могут быть такие добавки, как лечебные экстракты, масла, бальзамы, которые оказывают защищающее и восстанавливающее действие.
5. Отсутствие дискомфорта при нанесении. Качественная краска в готовом виде не должна быть слишком густой или жидкой. Оптимальная консистенция позволит окрасить волосы равномерно, придаст им естественный цвет. Производители выпускают окрашивающие смеси в нескольких формах:

• кремообразная – самая распространенная, не растекается, удобна в использовании;
• гелеобразная – обволакивает каждый волосок, способствуя равномерному и тщательному прокрашиванию;
• в виде мусса или легкой пенки чаще используется в качестве оттеночных средств.

Выбирая краску для волос, следует придерживаться вышеперечисленных характеристик, чтобы эксперименты с внешностью не принесли глобальных проблем.

Отличия профессиональной краски от обычной

Прошло то время, когда профессиональные краски были доступны исключительно специалистам в этой области. Теперь покупать качественную продукцию могут не только представители салонов красоты, но и обычные обывательницы для домашнего использования. Чтобы определиться какую краску для волос лучше выбрать, необходимо ознакомиться с ее достоинствами и недостатками.

Плюсы профессиональной краски:

• ее состав разрабатывается в зависимости от типа волос, что снижает вероятность их повреждения;
• специализированная краска не выделяет резкий химический запах;
• большинство красящих составов этого сегмента не способны вызвать аллергическую реакцию, пользоваться ими безопасно;
• благодаря богатому составу профессиональные краски более стойкие, не выгорают, не вымываются;
• широкая цветовая палитра;
• можно подобрать индивидуальную концентрацию краситель + окислитель отдельно для корней и для полотна волос;
• краска не въедается и не накапливается в волосах, что облегчает смыв цвета профессиональными средствами;
• в составе содержит большое количество смягчающих и ухаживающих компонентов.

Минусы профессиональной краски:

• стоимость такой краски на порядок выше масс-маркета, хотя есть и более бюджетные марки;
• сложность в использовании дома: для достижения нужного цвета сложно самостоятельно определить пропорции для смешивания оттенков, добавления окислителя и время окраски;
• окислитель не входит в состав краски, ее нужно купить отдельно и добавить в зависимости от структуры и типа волос.

Советы по выбору и использованию краски для волос

Подбор и применение красящих составов – дело сугубо индивидуальное. Но чтобы в погоне за идеальным образом не создать для себя дополнительных проблем, нужно следовать основным рекомендациям:

1. При покупке краски лучше заранее подробно ознакомиться с производителями, марками, почитать отзывы, подобрать оттенок, чтобы выбрать подходящий продукт.
2. Средства для окрашивания рекомендуется приобретать в магазинах, специализирующихся на продаже средств для профессионального использования.
3. Перед покупкой необходимо внимательно ознакомиться с составом и сроком годности продукции.
4. Для ослабленных, тонких и поврежденных волос не рекомендуется приобретать средства с агрессивными компонентами в составе, чтобы не усугубить состояние. Лучше их предварительно вылечить, используя специальные средства. А для поддержания приличного внешнего вида и закрашивания отросших корней на время восстановления можно воспользоваться щадящими оттеночными шампунями.
5. Если для достижения нужного цвета необходимо смешивать несколько оттенков, лучше использовать краску одной и той же фирмы. Смесь разных марок с отличными друг от друга составами и красящими веществами может дать непредсказуемый результат.

Рейтинг лучших марок и производителей

Положительные и отрицательные характеристики марок и производителей профессиональных составов для окрашивания помогут определиться с выбором стойкой и качественной продукции.

Рейтинг лучших профессиональных красок для волос составлен на основе экспертных мнений и отзывов реальных потребителей. Как выбрать профессиональную краску для волос правильно, на какие критерии она подразделяется, рассматривается далее.

По ценовой категории

Среди красящих составов, предназначенных для применения профессионалами, встречаются не только дорогие по цене марки. Многие производители изготавливают продукт, доступный для людей с ограниченным бюджетом.

Топ лучших красок для волос премиум-класса

Какая же самая лучшая профессиональная краска для волос:

Selective Professional Evo

Крем-краска имеет более 100 цветовых оттенков, в том числе экстравагантных и креативных. Адаптирована для домашнего использования. Большой объем тюбика – 100мл.

Достоинства: маленькое содержание аммиака, закрашивает седые волосы, стойкий цвет, ухаживающий состав, приятный запах, легкость в нанесении.

Недостатки: из-за востребованности сложно купить необходимый оттенок, высокая цена.

L’Oreal Professionnel Majiblond ultra

Подходит для покраски в холодных и теплых тонах блонда. Объем флакона – 50мл.

Достоинства: широкая палитра светлых цветов, высокая стойкость, содержание ухаживающих элементов в составе.

Недостатки: не закрашивает седые пряди, высокая стоимость.

3. Redken Chromatics Ultra Rich – редкие и эксклюзивные тона с глубоким цветом. Содержит экстрапротеины, восстанавливающие поврежденные волосы. Объем – 60мл.

Достоинства: гипоаллергенный состав, полностью закрашивает седину, обладает стойкостью цвета, содержит комплекс витаминов, без запаха, не окрашивает кожу.

Недостатки: высокая цена.

KydraCreme

Шадящий состав с натуральными компонентами. Подходит для естественного и эксклюзивного окрашивания.

Достоинства: бережно маскирует седину, хорошо распределяется, равномерно окрашивает, не течет, оказывает лечебное восстанавливающее действие, обладает приятным ароматом.

Недостатки: нет.

Matrix SoColor

Имеет более ста оттенков для равномерного окрашивания. Объем – 90мл. В зависимости от технологии производства краски этой марки могут быть с аммиаком в составе или без него.

Достоинства: масло жожоба в составе питает и сильно укрепляет локоны, идеально прокрашиваются по всей длине, устраняет желтоватый оттенок у обесцвеченных волос, насыщенные оттенки.

Недостатки: не способна полностью закрасить седину, может сушить.

Топ профессиональных красок для волос средней ценовой категории

Kaaral Silk Hydrolyzed

Содержит большое количество протеинов, сохраняет структуру волос и оздоравливает их. Около 80 цветовых вариаций. Объем тюбика – 60мл.

Достоинства: долгое время цвет не смывается, восстанавливает поврежденные локоны, содержит натуральные компоненты, приятно пахнет.

Недостатки: трудно удаляется с кожных покровов.

Lisap LK creamcolor

Имеет кремообразную текстуру, содержит природный спирт и масло кокоса, что дает шевелюре блеск и гладкость. Продаётся в тубах по 100, 75 и 60 мл.

Достоинства: большая палитра цветов, хорошо смывается с кожи, не вызывает жжение в процессе окрашивания.

Недостатки: может стать причиной сухости и жесткости волос.

Matrix Socolor beauty

Краска с яркими цветами и широкой палитрой оттенков. Краситель обладает свойством приспосабливаться под пигмент волоса.

Достоинства: цвет сохраняется на протяжении долгого времени, не сушит, в составе присутствуют масла и витамины, хорошо закрашивает седину.

Недостатки: не приспособлена к применению в домашних условиях.

Schwarzkopf Professional Igora Royal Absolutes

Густой состав надежно фиксирует цвет. Объем флакона – 60мл.

Достоинства: наносится и окрашивает равномерно, не течет, содержит витамины и микроэлементы, делает волосы блестящими, хорошо закрашивает седину.

Недостатки: сложно найти в магазинах.

Wella Professionals Illumina Collor

Краска с щадящим действием и продолжительным результатом.

Достоинства: питает волосы, сохраняет водный баланс, придает блеск локонам, доступная цена.

Недостатки: не выявлено.

Wella Koleston Perfect

Стойкая краска с насыщенными натуральными цветами и эксклюзивными оттенками.

Достоинства: не сушит, придает им блеск, цвет долго не смывается.

Недостатки: не обнаружено.

Estel Professional Princess Essex

Выбор стилистов и обычных девушек. Перманентная краска с ухаживающей формулой.

Достоинства: идеальное покрытие седины, большая цветовая палитра, равномерно ложится, доступна по цене.

Недостатки: неприятный запах.

Kapous Professional

Краска перманентной категории с натуральными компонентами в составе.

Достоинства: помогает получить яркий, стойкий цвет, придает мягкость и блеск, эффективно закрашивает седину.

Недостатки: со временем цвет тускнеет, сложно найти и купить в магазинах.

Какая бюджетная краска для волос лучше: топ 10 средств

Рейтинг лучших красок для волос по доступным ценам

Kaaral Professional Color Collection и Hair Cream Colorant

Проф. краска с минимальным содержанием аммиака и надежной фиксацией пигмента. Занимает первое место в рейтинге лучших марок по доступной цене.

Достоинства: длительная насыщенность цвета, разнообразие оттенков, обладает восстанавливающим эффектом.

Недостатки: не выявлены.

Estel Essex Princess

Помогает создать теплый или холодный оттенок с точным попаданием в тон без отклонений от нужного цвета.

Достоинства: насыщенный колор на длительный срок, просто использовать в домашних условиях, многообразие оттенков, ухаживающее действие за ослабленными и тонкими локонами.

Недостатки: не выявлены.

Londa Professional

Стойкая крем-краска для салонного или самостоятельного использования.

Достоинства: яркие оттенки, равномерное окрашивание, качественная маскировка седых прядей, легкость в использовании.

Недостатки: быстро тускнеет и смывается, цвет не всегда соответствует заявленному.

4. Garnier Color Naturals – качественный продукт для щадящего окрашивания, обладатель множества положительных отзывов. Наличие в составе природных масел сглаживает химическое воздействие аммиака.

Достоинства: насыщенные естественные оттенки, удобство нанесения, закрашивает седину, цвет соответствуют изображенному на упаковке.

Недостатки: обладает резким запахом, небольшой выбор темных оттенков.

Syoss Gloss Sensation

Бережно проникает в структуру локона и фиксирует красящий пигмент. Придает блеск и стойкость цвету.

Достоинства: низкая стоимость, стойкость до двух месяцев, доступна практически в любом супермаркете.

Недостатки: запах после окрашивания медленно выветривается.

Keen Color Cream

Кератин и протеины, содержащиеся в составе, поддерживают витаминный баланс и гарантируют средству эффективность.

Достоинства: равномерно наносится, не течет.

Недостатки: цвет быстро вымывается.

Revlon Professional Young Color Excel

Обеспечит стойкий и насыщенный цвет. Широкий спектр оттенков.

Достоинства: цвет не выгорает, не смывается на протяжении длительного времени. Обладает питательным комплексом, оказывает восстанавливающее действие для поврежденных и тонких локонов, подходит для любого типа волос.

Недостатки: не обнаружены.

Kapous Professional

Стойкая проф. крем-краска с богатой цветовой палитрой.

Достоинства: не повреждает структуру волоса, обладает эффектом разглаживания.

Недостатки: быстро вымывается, проблематично использовать в домашних условиях.

Concept Profy Touch

Распределяется по всей длине, обеспечивая равномерное окрашивание. Невысокое содержание аммиака не нарушает структуру локонов. На ряду с естественными оттенками имеются ультрамодные тона с перламутровым отливом.

Достоинства: возможно окрашивание седых прядей, не высветляет природный пигмент, обладает ухаживающим действием.

Недостатки: нет.

Indola Professional Blonde Expert

Красящий состав, предназначенный для обладательниц светлых локонов.

Достоинства: осветление и тонирование в одном флаконе.

Недостатки: возможна аллергическая реакция, поэтому перед применением средство необходимо протестировать.

Лучшие профессиональные краски по химическому составу

Топ красок с аммиаком

Farmavita Life Color Plus Professional

Перманентная краска в форме крема, проникающая в волосяную кутикулу для создания защитной пленки на коже головы.

Достоинства: тщательно закрашивает седину, исключает возникновение аллергических реакции и повреждений кожного покрова, делает волосы мягкими и эластичными, имеет широкую цветовую палитру.

Недостатки: инструкция по применению напечатана не на отдельном листе, а внутри коробки. Что создает характерные неудобства.

Lisap LK Anti-Age Creamcolor

Антивозрастной состав позволяет женщинам эффективно скрывать седину. Несколько раз в год компания выпускает новинки по уходу.

Достоинства: подходит даже для поврежденных волос, бережно защищает их.

Недостатки: сложно найти в свободной продаже.

Wella Professionals Illumina Color

Регулирует водный баланс, оказывает защитное действие.

Достоинства: цвет держится долгое время, средство обладает комплексом полезных веществ.

Недостатки: плохо удаляется с кожи.

Топ популярных безаммиачных красок

Какая краска для волос без содержания аммиака лучше подходит:

Matrix Color Sync

Кремовая консистенция фиксирует насыщенный оттенок на поврежденных и слабых волосах.

Достоинства: оказывает лечебное действие.

Недостатки: неприятный запах состава.

Schwarzkopf Professional Igora Royal

Бережная технология увлажняет и питает волосяные луковицы и кожный покров головы.

Достоинства: равномерно наносится и гарантирует стойкость окрашивания.

Недостатки: не совсем подходит обладательницам темных локонов.

L’Oreal Professionnel Diarichesse

Эффективно прокрашивает не только светлые, но и темные корни. Маскирует седину.

Достоинства: делает волосы блестящими, мягкими.

Недостатки: может подсушивать кончики.

Indola Zero Amm Color

Безаммиачный продукт немецкого производителя с бережным химическим содержанием. Объем флакона – 60мл.

Достоинства: доступная стоимость, разновидности оттенков, не повреждает локоны.

Недостатки: цвет со временем тускнеет.

Revlon Professional Revlonissimo

Одна из самых стойких составов с насыщенной палитрой. Не наносит вреда локонам.

Достоинства: содержит витамины, защищающие шевелюру от негативных воздействий окружающей среды, подходит для чувствительной кожи головы, предотвращает ломкость, закрашивает седые пряди.

Недостатки: резкий запах, продажа только в проф. магазинах.

Чтобы понять какую краску для волос лучше купить, необходимо обратить внимание на состав, в ней должны присутствовать природные компоненты. Новый цвет непременно должен вписываться в образ, подходить к оттенку глаз, кожи. При смене цвета локонов рекомендуется обратиться в парикмахерскую или салон красоты, где работают специалисты. Они помогут подобрать не только подходящий оттенок, но и в индивидуальном порядке определят марку, состав краски для определенного типа и структуры волос.

09.01.2020

Бальзамы для волос Matrix или Бальзамы для волос Kapous Professional

Бальзамы для волос Matrix отзывы

Matrix Total Results Color Obsessed Кондиционер для окрашенных волос с антиоксидантами, 300 мл отзывы

Оценка: ★★★★★
Дарья

Достоинства: Не утяжеляет волосы
Комментарий: После него хорошо расчёсываются волосы, один из любимых матриксов

Оценка: ★★★★★
Веселовская Евгения Сергеевна
Волосы мягкие и послушные.Использую вместе с шампунем.Рекомендую.

Оценка: ★★★★★
Мария

Достоинства: Качество
Недостатки: Нет
Комментарий: Работает только с шампунем этой же фирмы

Оценка: ★★★★★
Наталья Даниленко

Достоинства: Мои волосы довольны
Недостатки: No
Комментарий: Обожаю этот кондиционер,поддерживает цвет волос после окрашивания , они хорошо напитанные, кажутся более густыми и плюс блеск бриллианта. Закончился недавно после полугодового использования. Куплю еще

Оценка: ★★★★★
Оксана Копеева

Достоинства: Не в первый раз уже заказываю. Очень советую! Намного дешевле , чем в рознице. Пользуюсь уже два года. Долго держится окрашенный волос. Лично у меня даже после применения этой серии перестали выпадать свои волосы. Не знаю совпадение или нет! Очень легко после него расчёсывать! Волосы блестят

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Бальзамы для волос Kapous Professional отзывы

Kapous Professional Бальзам увлажняющий для волос с маслами авокадо и оливы, 1000 мл отзывы

Оценка: ★★★★★
анна скворцова

Достоинства: текстура обволакивающая, обьем
Недостатки: нет дозатора
Комментарий: отдушка фруктово-тропическая

Оценка: ★★★★★
Эменджи Лилия
Достоинства: Отличный бальзам. Хороший расход.

Оценка: ★★★★★
Киселева Анастасия

Достоинства: низкая стоимость, после применения волосы мягкие, легко расчесываются, не перегружены
Недостатки: не обнаружила
Комментарий: у меня кудрявые блондированные волосы, это бальзам идеально подошел. волос мягкий, объем сохранился, кудри хорошие. бальзам идеально пододходи для частого применения. Капус как всегда приятно удивил!

Оценка: ★★★★★
Чиркова Инна
Достоинства: фирма изготовитель, качество
Недостатки: нет
Комментарий: большой объем на долго хватает. Оптимальное цена-качество

Оценка: ★★★★★
Марина Сердюк

Достоинства: Хороший бальзам, экономичная упаковка

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Kapous Бальзам для волос с маслом арганы Arganoil 200 мл отзывы

Оценка: ★★★★★
Дементьева Оксана
Достоинства: супер бальзам. о что подходит моим волосам. пользуюсь больше 2х лет, ни разу не пожалела. волосы блестят, очень мягкие
Недостатки: нет

Оценка: ★★★★★
Гончарова Светлана
Достоинства: Отличный бальзам в дуэте с шампунем замечательно

Оценка: ★★★★★
Безрукова Ксения

Достоинства: отличный бальзам, волосы напитанные и увлаженные.
Недостатки: нет

Оценка: ★★★★★
трухан оксана
Бальзам отлично работает в тандеме с шампунем из той же линейки, легко смывается

Оценка: ★★★★★
Юлия
Бальзам мне отлично подошел! Хорошо питает волосы, они после него шелковистые и хорошо расчесываются. Недостатков нет

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Kapous Professional Бальзам для окрашенных волос с рисовыми протеинами и экстрактом женьшеня, 1000 мл отзывы

Оценка: ★★★★★
М Марина
Комментарий: Большой объем, хватает на долго. Приятный ненавязчивый запах.

Оценка: ★★★★★
Бобрикович Людмила Витальевна

Достоинства: Очень классный бальзам,беру не первый раз,светлый волос не желтит,цвет не смывает,за такой объём ,очень приятная цена

Оценка: ★★★★★
Евгения Барышева

Достоинства: Хороший бальзам и шампунь из этой серии, больший объем
Недостатки: Нет

Оценка: ★★★★
КОРНИЛОВА ИРИНА
Достоинства: Запах супер!!! Это почувствовала ещё в коробке тк протек!! Бутылочка протекла крыска плохо закрыта Обидно ! цена супер !! Ещё не пользовалась но думаю будет супер !! Юрода др серию до этого!
Недостатки: Плохая упаковка
Комментарий: Хотелось бы плотно закрытые бутылки получать!!!

Оценка: ★★★★★
Римарева Оксана

Достоинства: Отличный бальзам! Подходит для окрашенных волос. Большой объём, хватает надолго. Рекомендую!

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Kapous Бальзам для восстановления волос Caring Line Profound RE 350 мл отзывы

Оценка: ★★★★★
Кокоева Анна Вячеславовна
Достоинства: Цена
Недостатки: Нет
Комментарий: Хорошо увлажняет, волосы не электризуются после него

Оценка: ★★★★★
Ольга
Достоинства: Чудесный бальзам. Приятный аромат, который остается на волосах в течение дня. Волосы после его применения мягкие на ощупь и гладенькие. После использования утюжка волосы выглядят как после салонных процедур.
Недостатки: Нет
Комментарий: Хочу попробовать всю линейку Kapous Professional

Оценка: ★★★★★
Дроздова Анастасия Сергеевна

Достоинства: Неплохой бальзам
Комментарий: Что на счёт восстановления не знаю, но то, что волосы распутывает на ура — это точно.Спасибо озон.

Оценка: ★★★★★
Ольга Ильина

Достоинства: Прекрасный состав , видимый эффект
Недостатки: Нет
Комментарий: Рекомендую кондиционер, хороший состав, видимый результат , волосы отлично расчесываются!

Оценка: ★★★★
Эльвира

Достоинства: Запах, Обьем
Комментарий: Надеялась на лучший эффект на волосах, но работает как обычный бальзам, волосы после плотные, мягкие, а запах просто божественный!

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Kapous Professional Studio Бальзам для всех типов волос «Малина», 1000 мл отзывы

Оценка: ★★★★★
Щепёткина Ксения Юрьевна
Достоинства: качественнный и ароматный
Недостатки: нет в комплекте дозатора
Комментарий: бальзам серии kapous Professional очень порадовал. Большой объем. запах очень приятный, нежный. Волосы мягкие и гладкие. однозначно советую.

Оценка: ★★★★★
КОРНИЛОВА ИРИНА
Достоинства: Огромный объём ! Цена меньше чем в магазине! Качество отличное , пользуюсь часто и хватает на семью из 4 на 3 -4 мес
Недостатки: Может не всем подойти! Мне др серия не подходит!
Комментарий: Закажу сейчас ещё др варианты тк цена супер!

Оценка: ★★★★★
Виктор

Достоинства: Большой объем, хватает на долго за приемлимую цену.
Недостатки: Нет
Комментарий: Использую после применения идентичного шампуня, с сухими волосами без него ни как, с жирными жена использует только шампунь. Всем рекомендую.

Оценка: ★★
Мария

Достоинства: объем
Недостатки: все остальное
Комментарий: не понравился. запах не оч, консистенция. шампунь тоже плохой, жирные волосы быстро пачкаются. брала на пробу, стоИт в итоге

Оценка: ★
Маргарита

Достоинства: Не нашла
Недостатки: Нет
Комментарий: нет запаха малинки, нет ухода и увлажнения, ерунда за 3 копейки, только стоит вот этот бальзам далеко не 3 копейки :(((

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

Kapous Professional Бальзам для всех типов волос с ментолом и маслом камфоры 1000 мл отзывы

Оценка: ★★★★★
Курячая Светлана
Этот бальзам не променяю ни на что, покупаю на протяжении нескольких лет а также другие профессиональные средства, но всегда возвращаюсь к нему

Оценка: ★★★★★
Инна

Достоинства: Отличный бальзам
Недостатки: Нет
Комментарий: Большой объём. Приятный запах ментола. Волосы после применения мягкие, хватает на долго. Обожаю продукцию капус. При сушке феном чувствуешь холодок, тк бальзам с ментолом??

Оценка: ★★★★★
Мария Логинова

Достоинства: Цена, объём
Недостатки: Докупить помпу
Комментарий: Очень нравится Капус по цене. С этим ароматом ментола тоже была знакома. Пользуюсь давно, помпы были свои куплены ранее. Удобно дозироваться.

Оценка: ★★★★★
Светлана

Достоинства: Освежает)
Комментарий: мне подошел, волосы прям живые

Оценка: ★★★★
Сапрыкина Алина
Достоинства: Эффект , цена супер
Недостатки: Запах
Комментарий: Мяту люблю , но тут напоминает запах *звездочки*, несмывашками перебивается , так что можно брать

Купить со скидкой

Промокод для скидки MAT6375

рейтинг профессиональной и непрофессиональной, какая лучше Капус, Матрикс или Лореаль

Сегодня женины все чаще и чаще стали менять свой цвет волос для смены образа. Причем женщины используют для этого как яркие оттенки краски для волос, так и природные под свой цвет волос. Но порой из-за некачественного красителя волосы выглядят нездоровыми, тусклыми и неопрятными.

Причина в том, что в став краски находятся агрессивные компоненты, которые проникают вглубь волос и нарушают их структуру. Чтобы не допустить такого результат, необходимо более тщательнее выбирать краску для волос.

Профессиональные

Какие краски для волос лучше? Как известно к профессиональным краскам относят те, которые используют для окрашивания волос в салонах. Конечно, это не запрещает применять их дома, но в таком случае вы рискуете получить не тот результат, на который рассчитываете. Рассмотрим рейтинг красок 2015-2016:

Estel Professional

Этот бренд занимает лидирующее место среди профессиональных составов по окрашиванию волос. В основе этого косметического продукта положен богатый витаминный комплекс, в составе которого имеются кератины, оказывающие восстановительный эффект.

Благодаря таким целебным веществам, как зеленый чай и гуарана, удается оказать увлажняющий и питательный эффект на каждый волосок. В результате этого шевелюра приобретает здоровый внешний вид.

Кроме мощного питательного влияния, краса Эстель позволяет получить стойкое окрашивание. Насыщенный и блестящий цвет будет радовать вас в течение 6 недель. В палитре имеется около 74 оттенков, в том числе и модный цвет шоколад от Эстель. В ней также можно найти яркие цвета красок для волос.

Также популярна краска для волос Keune.

Schwarzkopf Professional Igora Vibrance

Немецкая краска для волос. Этот продукт также относится к разряду профессиональных. Краска по своей текстуре напоминает крем, в ее составе отсутствует аммиак, следовательно, она не обладает резким неприятным ароматом. Краска для волос Игора позволяет получить стойкий и насыщенный цвет.

При окрашивании состав равномерно распределяется по волосам, в результате чего удается достигнуть идеального цвета, приближенного к натуральному.

В составе присутствуют лечебные компоненты, действие которых направлено на восстановление структур прядей изнутри и придание им здорового вида. Цвет на волосах радует своей насыщенностью на протяжении 2-3 недель. Палитра краски для волос Шварцкопф Игора достаточно обширная, так что можно удовлетворить требования всех женщин. Подобные оттенки можно найти в палитре цветов Колестон с названиями.

Возможно вам интересно, как делать балаяж на темные волосы средней длины.

L’Oreal Casting creame gloss

Этот состав хотя относится к профессиональным, применять его можно дл окрашивания дома. По своей текстуре краска представлена в формате крема. Она не оказывает негативного влияния на пряди, идеально закрашивает седые пряди. В составе имеется пчелиное молочко, которое оказывает питательный и восстанавливающий эффект.

После окрашивания волос этим составом цвет получается ярким, глубоким и равномерным. Держится он до 6 недель. В составе отсутствует аммиак, поэтому средство не имеет резкого аромата. Средство представлено 28 оттенками, как и палитра краски для волос Ревлон.

Kapous

Эта краска среди всех профессиональных составом является достаточно экономичной. Она позволяет получить стойкий цвет, при этом е оказывая вредного влияния на волосы. Палитра характеризуется своим многообразием.

Подходит для тех женщин, которые давно мечтают воплотить в реальность свои самые креативные идеи, как и с палитрой Crazy Color.Окрашивание с этой краской лучше выполнить в салоне, так как дома можно получить совсем не тот оттенок, который имеется на упаковке.

Wella Wellaton

Краска для волос Велла представлена двумя видами: краска-крем и краска-мусс. И тот, и другой вариант является качественным. Применять краску можно закрашивания седых прядей, с целью получения яркого, глубокого цвета надолго.

Состав краски имеет органические масла. Их задача состоит в том, чтобы бережно ухаживать за шевелюрой. При постоянно применении удается реанимировать поврежденные волосы, придать им гладкость. В палитре имеется 32 оттенка.

C:EHKO Color Explosion

Эта профессиональная краска может применяться как в салоне, так и дома. Средство обладает высокой стойкостью, надежно закрашивает седые пряди. Кроме этого, оно равномерно окрашивает шевелюру, не течет, благодаря чему цвет получается ровным и абсолютно совпадает с тем, который был заявлен производителем.

В основе краски положен щадящий комплекс, который состоит их кератина и миндального протеина. Он не только ухаживают за волосами, но и восстанавливают их поврежденную структуру. В палитре имеется около 100 различных оттенков. В коллекции также можно найти спреи для окрашенных волос для смелых экспериментов.

А вот какова цена краски для волос Лореаль Омбре, можно понять если прочесть содержание данной статьи.

Посмотреть фото краски для волос горький шоколад, можно здесь в статье.

На сколько широка палитра цветов краски для волос Матрикс и какие существуют фото данной краски, можно увидеть здесь: https://soinpeau.ru/volosy/kraski/matrix-palitra.html

Непрофессиональные

Получить глубокий и стойкий эффект можно даже при окрашивании волос в домашних условиях. Для этого нужно знать самые лучшие непрофессиональные краски.

L’Oreal Excellence Creme

Эта краска относится к самым лучшем ухаживающим составом. Перед тем, как ее наносить на пряди, необходимо обработать волосы специальной сывороткой, которая защитить шевелюру от негативного влияния. В составе присутствует про-кератин, который осуществляет уход за каждым волосом, восстанавливая их поврежденную структуру.

Хотя краска и содержит аммиак, запах у нее не сильный, а скорее всего, приятный. После смывания краски отсутствует ощущение стянутости кожи головы, имеется равномерный и блестящий цвет, пряди приобретают мягкость и шелковистость. Этот косметический продукт можно применять для 100% закрашивания седых прядей. Полученный цвет будет радовать вас долго, ведь он не поддается выгоранию на солнце.

Garnier Color Naturals

Это средство относится к категории бюджетных. Краску можно использовать для окрашивания в домашних условиях. При разработке продукта использовали 3 вида масле, которые позволяют защитить локоны от негативного влияния колера.

Одновременно они питают и реанимируют поврежденные пряди. Наносить краску очень просто, так что сделать это можно самостоятельно даже на длинные волосы. В результате вы получите равномерный цвет, на 100% устраняющий седые пряди. Полученный оттенок будет радовать вас на протяжении 3-4 недель. В палитре содержится 30 вариантов цветов.

Фара

Эта краска также относится к бюджетным вариантам. В ее основе положены растительные компоненты, которые кроме получения стойкого цвета еще оздораввливают шевелюру. Для получения стойкого оттенка в составе краски присутствует такой ингредиент, как Transcutol CG. Благодаря ему цвет получается стойким, насыщенным и сохраняется в течение месяца.

Для седых волос

Седые волосы не всегда удается восстановить любой краской. Для надежного устранения такой проблемы, необходимо обратиться за помощью к тем производителям краски, которые изготовляют специальную линию составов, эффективно маскирующих седину.

Сюда можно отнести:

1. Матрикс. Эта краска занимает лидирующую позицию причина в том, что она содержит аммиак в малом количестве. Но при этом эффективно закрашивает седые пряди. В палитре имеется 17 оттенков, преимущественно золотистого тона. Такие же оттенки найдете в палитре красок Концепт.
2. Игора. В палитре можно отыскать красные, рыжие, русые тона, а также всеми любимый цвет блонд. Краска Игор гарантирует эффективное закрашивание седых прядей. При правильном окрашивании волос можно получить цвет, который указан производителем на упаковке.
3. Эстель. В ассортименте профессиональной краски Эстель имеется коллекция красителей, предназначенных для седых волос. Главными преимуществами краски остаются приемлемая цена, богатый ассортимент цветов. Стойкость у краски высокая, смывание происходит постепенно.
4. Эстель Сильвер. Этот краситель сможет закрасить седые волосы, при условии, что их количество не превышает 70%. В результате можно получить глубокий и темный цвет, по сравнению с предыдущим его собратом. Для приготовления раствора необходимо смешать краску с оксигеном в равном соотношении. Пока этот продукт пользуется не такой востребованностью, как его основная линия, но, тем не менее, сегодня женщины все чаще стали ее применять.
5. Лореаль. Краска обладает высокой степенью покрытия седых волос. По своему качеству этот продукт может сравниться со многими профессиональными составами.

Отзывы парикмахеров

• Алина, 43 года: «У меня в салоне большим спросом пользуется краска для волос торговой марки Лореаль. В коллекции присутствует широкий ассортимент косметических средств. Здесь можно отыскать краску природных и ярких оттенков, безаммичный состав, для тех, кто не хочет вредить своей шевелюре, а также краску для закрашивания седых прядей. Моим клиентам очень нравится, что после окрашивания волосы не выпадают, не ломаются. Кроме этого, клиентки отмечают, что локоны стали мягкими, блестящими, их стало легко расчесывать. Я доверяю своим девушкам, поэтому постоянно обновляют палитру, когда производитель выпускает новые цвета».
• Антон, 34 года: «Я на протяжении нескольких лет доверю такому косметическому продукту, как Гарньер. Я считаю, что эта краска универсальная, ведь производитель учел все требования клиентов. Наносить ее очень просто, она не течет, равномерно окрашивает всю шевелюру. Цвет очень насыщенный, а держится он таким в течение месяца. Краска Гарньер содержит в себе комплекс ухаживающих компонентов, которые позволяют получить ровный, яркий цвет, а еще восстанавливает структуру волос».

По ссылке – описание палитры красок Гарньер Колор Нейчарлс.

На видео- лучшая краска для волос рейтинг:

Какие отзывы о самой щадящей краски для волос существуют в настоящее время, подробно описано здесь в статье.

Какова палитра оттенков краски для волос Лореаль существует в настоящее время, можно прочесть в статье.

А вот что собой представляет краска для волос l oreal preference, и на сколько широка палитра данной краски, указано здесь в статье.

На сколько широка палитра цветов краски для седых волос Эстель, подробно указано в статье.

Отзывы клиентов

• Антонина, 25 лет: «Не так давно я стал пользоваться профессиональной краской Эстель. Вначале я ходила в салон, но потом решила сэкономить и стала проводить окрашивание дома. Делаю это сама, ведь консистенция продукта позволяет равномерно наносит состав на всю длину волос и не переживать ,что он потечет. После окрашивания мои локоны заметно оживляются, приобретают блеск и гладкость. Повторное окрашивание мне понадобиться только через 1,5 месяца».
• Светлана, 45 лет: «Для окрашивания седины мне пришлось перепробовать множество красок, пока я не нашла Матрикс. Этот продукт мне подходит, так как идеально скрывает белые пряди. Цвет получается насыщенным, максимально приближенным к натуральным. Эта краска позволяет получить моим волосам эффективную защиту от длительного влияния фена и утюжков. Оказывается, в составе присутствует комплекс витаминов, который благотворно влияет на шевелюру и снижает агрессивное воздействие на волосы от краски».

Сегодня выбор красок для волос просто огромный. Каждый производитель желает полностью удовлетворить пожелания своих клиентов. Результатом работы специалистов становится целый комплекс красителей: с аммиаком, без аммиака, для седых прядей, для осветления.

лучшая краска для волос: какая краска для окрашивания волос лучше

Желание многих девушек выделиться, добавить себе оригинальности толкает их на некоторые эксперименты — изменение имиджа. Важно при этом не забыть позаботиться о красоте и здоровье волос. А это зависит от умения правильно выбрать краску.

Почему стоит выбирать профессиональные краски?

При выборе средства для девушек всегда остро стоит вопрос — обязательно ли приобретать профессиональные краски для волос? Краски какого производства стоит приобрести — российские или импортные? Часто стоимость таких продуктов отталкивает потенциальных покупательниц от покупки. И все же лучше использовать профессиональные марки красок и вот почему:

• содержание окрашивающих элементов. Профессиональные средства содержат в составе более щадящие компоненты. При салонном окрашивании, профессионал смешивает краску с окислителем, содержащим оптимальный процент кислоты. Подбор происходит с учетом индивидуальных особенностей клиента, тогда как обычные краски содержат в составе больший процент таких кислот, что наносит значительный вред;
• процентное содержание ухаживающих элементов. Профессиональные марки имеют большее содержание специальных компонентов для ухода после окрашивания. Эти элементы обычно нацелены на питание, увлажнение, а также поддержание стойкости цвета;
• цветовая палитра. Возможность смешивания оттенков для получения идеального цвета — не ограничена. Такие краски позволяют воплотить в жизнь даже самые смелые фантазии;
• стойкость. Частое окрашивание наносит вред. Только профессиональные продукты позволяют сократить количество походов к парикмахеру, ведь их стойкость в разы больше, чем у обычных домашних красок. Салонное окрашивание не смывается, о давности могут сказать только отросшие корни;

Как среди многообразия подобрать качественную краску для волос?

Сегодня на рынке индустрии красоты представлено огромное количество хороших, профессиональных окрашивающих средств. Выбирая краску, нужно опираться на следующие пункты:

• природный цвет волос;
• тон кожи;
• особенности структуры;
• возраст;
• индивидуальные особенности, например, аллергия на определенные компоненты;

Натуральный цвет и структура — это уникальные особенности волос каждой девушки. Один и тот же оттенок может по-разному выглядеть у двух людей именно из-за этих двух пунктов.

Профессиональные краски безопасны для людей с чувствительной кожей головы и аллергиков, потому что они не окрашивают кожу. При всем многообразии средств для окрашивания среди импортных производителей краски производства России также представлены на рынке в большом количестве. Они могут составить конкуренцию зарубежным аналогам. Estel — самая известная русская марка, входящая в недорогой ценовой сегмент.

При выборе краски стоит обращать внимание на ее стойкость. Она бывает следующих видов:

• краски с аммиаком (перманентные). Такой состав глубоко проникает, закрашивает седину, обеспечивая стойкость;
• полуперманентные. Из-за своего щадящего состава проникает неглубоко. Стойкость таких красок для волос рассчитана на 25-30 процедур мытья головы;
• безаммиачные. Менее стойкие краски, выдерживают 8-10 процедур мытья головы;
• временные. Тот тип красок, который позволяет чаще экспериментировать с внешностью без особого вреда для здоровья. Цвет краски сохранится до первого мытья головы;

Стойкость краски обеспечивает процент окислителя, который содержится в составе, поэтому следует также внимательно изучить его особенности:

• 3% — для легкого окрашивания в тон натуральному цвету. Подходит обладателям чувствительного типа кожи;
• 6% — закрашивает седину, позволяет изменить цвет на 1-2 тона;
• 9-12% — глубокое окрашивание, позволяющие перекрыть цвет на 2-3 тона. Не подходит для чувствительной кожи, так как может привести к ожогам;

Выбирая средство для окрашивания, необходимо учитывать все индивидуальные моменты, тогда процесс выбора перестанет быть сложным. Процесс покраски не навредит волосам, а результат удовлетворит все ожидания.

Лучшие профессиональные краски премиум-класса для волос

Профессиональные краски представлены в большом количестве. Как не растеряться среди всего этого многообразия средств для волос и на какие крем-краски стоит обратить внимание?

Стойкая крем-краска Kydra

Крем-краска французской марки Kydra имеет нежную текстуру, позволяющую быстро и легко наносить продукт. Благодаря минимальному содержанию аммиака продукт безопасен для всех типов кожи головы. Специальная формула позволяет смешивать оттенки между собой, добиваясь желаемого результата. Содержащиеся в составе природные элементы, бережно воздействуют на структуру волоса, не разрушая его, при этом сохраняя яркость и насыщенность оттенков. Справляется с закрашиванием седины.

Краска для волос Kydra Nature

Крем-краска для волос представлена в широкой цветовой палитре, позволяющей экспериментировать с оттенками. Растительные компоненты обеспечат уход во время окрашивания. Марка Kydra не содержит в составе агрессивных соединений, поэтому может быть использована аллергиками и беременными девушками.

Тонирующая безаммиачная крем-краска для волос KydraSofting

Разработанная косметологами инновационная формула отличается тем, что помимо создания красивого цвета, средство обеспечивает защиту поврежденным прядям, увлажняя их. Это достигается благодаря безаммиачному составу, который бережно окрашивает волосы. Легкое нанесение гарантирует плавные переходы в цвете, закрашивание седины. Краску можно использовать в домашних условиях, так как она проста в нанесении.

Перманентный краситель Paul Mitchell The Color

Американская краска для волос с использованием пчелиного воска, равномерно распределяется, обеспечивая бережное окрашивание. 1.5% содержание аммиака — гарантия того, что волосы не пострадают во время окрашивания. Кремовая текстура позволяет продукту легко ложиться от корней до кончиков. Профессиональная краска с эфиром эвкалипта защищает кожу головы от повреждений и раздражений.

Полуперманентный краситель для мягкого тонирования Paul Mitchell Shines

Краситель для волос из США без аммиака используется для тонирования. Средство обеспечит уход: питание, уплотнение, увлажнение. А также сделает волосы блестящими и шелковистыми. Защита от вредного ультрафиолетового излучения достигается из-за специального фильтра, присутствующего в краске. Можно использовать, как для усиления, так и для нейтрализации цвета. Окрашивание держится около месяца.

Тонирующие красители для креативного окрашивания Paul Mitchell Inkworks

Профессиональное средство для волос производства США. Состав пигмента не содержит аммиак — это позволяет окрашиванию, тонированию или ламинированию быть безопасным. В линейке представлены 8 ярких оттенков, которые можно смешивать между собой. Благодаря ухаживающим компонентам средство можно использовать обладательницам ослабленных, поврежденных волос. Текстура пигмента позволяет ему обволакивать каждый локон, защищая его от внешних воздействий, обеспечивая защиту, увлажнение и блеск.

Капли цвета Paul Mitchell Color Shots

Американская краска для волос новой формы представляет собой капли цвета — это концентрат цветового пигмента. Проникая глубоко в состав корня, такое средство гарантирует стойкость. Капли цвета разводят с красителем в следующих пропорциях — на 60 мл краски рекомендуется от 3 до 6 капель. Палитра из 5 ярких оттенков не включает в себя коричневые тона.

Десятиминутный краситель для мужчин Paul Mitchell Flashback

Средство позволит за 10 минут избавиться от седины. Состав не содержит аммиака, поэтому не вредит при окрашивании. Гелевая текстура с приятным ароматом легко наносится, обеспечивая стойкость до 7 недель. Палитра, включающая 6 натуральных оттенков, позволяет смешивать цвета, для получения натурального. При нанесении охлаждает и успокаивает кожу головы.

Профессиональный полуперманентный краситель без аммиака Keune Semi

Подходит для первого окрашивания благодаря безаммиачной формуле. Средство избавляет от желтизны, создавая холодный тон. Приятный запах и мягкая, маслянистая текстура равномерно наносится, поэтому хорошо подходит для использования в домашних условиях. Обеспечивает мягкость, послушность и блеск.

Профессиональный перманентный краситель Keune Tinta

Перманентный краситель рекомендован в случае большого количества седины. Имеющиеся в составе керамиды и протеины шелка глубоко проникают внутрь, обволакивая и разглаживая, запуская процесс восстановления. Пигмент равномерно наносится, обеспечивая мягкие переходы и надежный результат.

1922 by Keune — профессиональный краситель для мужчин

Безаммиачный состав с легкой текстурой крем-геля позволит совершить окрашивание меньше, чем за 5 минут. Формула позволяет закрашивать седину в естественный оттенок, не проникая в кожу головы. Обладает ненавязчивым, цитрусовым ароматом.

Lebel Cosmetics Materia G — стойкий кремовый краситель для волос с сединой

Средство, не только окрашивает, но и оказывает ухаживающий эффект, без аммиака позволяет скрыть седину, меняя цвет на 5 тонов. Стойкий эффект краски позволяет сохранять цвет до 8 недель.

Lebel Cosmetics Materia New — обновленный стойкий кремовый краситель для волос

Японский продукт, созданный по специальным технологиям, способен проникать глубоко в структуру корней, восстанавливая и насыщая цветом. Состав на основе растительных компонентов увлажняет кожу головы, защищая от сухости у корней. Богатый, насыщенный цвет может сохранять свой эффект до 8 недель.

Lebel Cosmetics Materia M Лайфер — полуперманентный краситель для волос

Средство обеспечит ровное, красивое окрашивание. Благодаря простому нанесению процедуру можно проводить в домашних условиях. Это займет не больше 30 минут. Краситель подходит для закрашивания седины.

Профессиональная косметика Davines (Италия). Система стойкого кондиционирующего окрашивания Davines Mask with vibrachrom

Новый метод окрашивания от итальянской марки усиливает эффект блеска, оказывая защитный эффект, обеспечивая стойкость цвета. Состав с низким содержанием аммиака не разрушает природное строение, что делает окрашивание безопасным.

Красители и оксиды Farmavita

Итальянская линейка включает в себя: множество стойких окрашивающих средств, осветляющих порошков и активаторов. Стойкость окрашивания обеспечивает специальный перманент, благодаря чему на коже головы образуется защитная пленка, которая предотвращает выгорание цвета на солнце и обеспечивает увлажнение.

Стойкая крем-краска Brelil Colorianne Classic

Профессиональная краска для волос итальянской марки Brelil — стойкий краситель, закрашивающий седину, не травмируя при этом волосы. Большой выбор оттенков позволит найти нужный, обеспечивая насыщенный цвет без вреда.

Стойкая крем-краска Brelil Colorianne Prestige

Крем краска итальянского производства обеспечивает стойкое окрашивание и яркость цвета. Проникая в кутикулу, закрашивает седину изнутри. Минимальное процентное содержание аммиака позволяет не травмировать волосы при процедуре окрашивания. Чистое окрашивание с мягкими переходами соответствует оттенку, указанному на упаковке.

Колорирующий крем Brelil CC Cream

Колорирующий крем от Brelil professional специальная краска, оказывающая не только окрашивающий, но еще и защитный эффект. Мягко воздействуя на корни продукт питает, ухаживает и увлажняет, делая волсы блестящими и послушными. Производитель гарантирует мягкое нанесение без раздражений.

Колорирующее средство 2 в 1 Brelil Fancy Colour

Профессиональная краска для окрашивания и обесцвечивания. Может использоваться как усилитель цвета, так и для окрашивания отдельных локонов. Благодаря большой палитре можно добиваться эффекта фантазийного окрашивания. Новая разработанная формула обеспечивает простое и быстрое окрашивание. А входящие в состав питательные масла увлажняют, питают и защищают, гарантируя безопасное окрашивание, не разрушающее структуру.

Гель-краска без аммиака Brelil Colorianne Essence

Новейшая формула гель краски стала сенсацией, способной без аммиака обеспечить 100% окрашивание. Бережное окрашивание и чистые тона с плавными переходами — результат использования такого продукта. Щадящий состав позволяет заботиться о здоровье кожи головы, не оказывая разрушительного воздействия. Продукт имеет легкий аромат, ухаживает, наполняя пряди блеском и мягкостью.

Cпрей-макияж для волос Brelil Colorianne Make-Up

Профессиональная краска подходит для русых волос, закрашивая имеющуюся седину. Продукт в форме спрея быстро наносится, равномерно распределяясь по длине, делая незаметный переход от корней до кончиков. Спрей легко смывается, это не стойкое окрашивание, а временная маскировка отросших корней или проступившей седины.

Профессиональная линия тонирующих масок с интенсивными пигментами Joico Color Intensity

Тонирующая маска восстанавливает яркость на потускневших волосах. Специальные компоненты, подстраиваясь в корни, восстанавливают их изнутри, увлажняя и смягчая пряди. Устраняет ломкость, делая упругими и сильными. Эффект окрашивания выдерживает 10 процедур мытья.

Перламутровая полироль для блондинок Paul Mitchell Flash Finish

Полироль для блондинок от professional Paul Mitchell создает перламутровый эффект, избавляя от желтизны. Для получения желаемого результата оттенки можно смешивать друг с другом. Входящие в состав компоненты обеспечивают увлажнение после сложной процедуры осветления. Полироль можно использовать не только блондинкам. Русые, темные волосы приобретут здоровый, блестящий внешний вид.

Осветляющий порошок Lebel Cosmetics Platinum Bleach

Мелкодисперсная пудра предназначена для бережного осветления до 7 тонов. Минимальный вред достигается благодаря специальной формуле, которая не разрушает структуру прядей.

Фантазийный чистый пигмент Brelil Fancy Purepigment

Чистый пигмент с кислой средой можно использовать без окислителя. Рекомендовано к использованию только на осветленных или натуральных светлых прядях. Пигмент усиливает цвет, нейтрализует имеющиеся ненужные оттенки, а также подходит для окрашивания отдельных прядей.

Профессиональные окрашивающие средства — гарантия стойкости и безопасности. Выбирать российские или зарубежные марки профессиональных красок дело предпочтений и ценового сегмента. Важно помнить — выбирая продукт нужно учитывать особенности своего организма. Тогда окрашивание не навредит, а принесет только пользу.

Пропорции окислителя и краски для волос. Применение крем-краски “Kapous Professional”

Если вы решили самостоятельно окрасить волосы, используя
профессиональный краситель Матрикс Соколор (MATRIX Socolor.beauty), то
вам потребуется к использованию данного продукта, а также информация по
выбору тона и окислителя.

Одно из отличий профессиональных продуктов от продуктов масс-маркет —
крем-краска и оксилитель продаются как два отдельных продукта.
Поэтому
решив применить для окрашивания волос салонную краску, вам необходимо
будет выбрать не только оттенок, но и оксислитель с правильным
содержанием перекиси водорода (от 2,7% до 12%). Концентрация перекиси
водорода выбирается на основе желаемой степени осветления и
насыщенности оттенка волос.

Обратите внимание, что крем-краску Матрикс СоКолор нужно смешивать с
кремом-оксидантом Cream Developer этой же марки.

Выбрать оттенок, вы можете воспользовавшись нашей .

Как выбрать окислитель в Матрикс Соколор Бьюти:

3% перекиси водорода — для окрашивания тон-в тон или на 1 уровень
светлее исходного тона.
6%- перекиси водорода — для окрашивания на 2 уровня светлее исходного
тона.
9%- перекиси водорода — для окрашивания на 3 уровня светлее исходного
тона.
12% — перекиси водорода — для окрашивания на 4 уровня светлее исходного
тона (или на 5 при использовании оттенков из ряда «Ультра-Блонды»).

Матрикс СоКолор — инструкция для приготовления красящей смеси:

Соотношение краски и окислителя Соколор — 1 к 1. Это значит, что на
одну тубу красителя (90 гр.) вам нужно добавить из литрового флакона
окислителя также 90 гр. Смесь разводят в любой неметаллической посуде,
если вы используете для смешивания закрытый шейкер, то сразу после
смешивания крышку нужно снять.

При использовании оттенков Ультра-Блонды на 1 часть краски нужно брать
2 части окислителя (12%).

Матрикс СоКолор — инструкция для нанесения:

Перед нанесением краски на волосы проведите тест на чувствительность к
компонентам смеси. Если во время теста вы заметили на коже появление
пятен или ощутили сильный зуд или жжение — смойте краску и откажитесь
от дальнейшего окрашивания.

Если окрашиваемые волосы в плохом состоянии — ранее осветленные и
поверхность очень пористая, то рекомендуем также провести тест на
небольшой пряди, что бы увидеть результат окрашивания.

Как и при использовании любой другой краски вам нужно выбрать метод
нанесения — первичный или вторичный. Оба варианта подразумевают
нанесение красящего состава на сухие волосы.

ПЕРВИЧНОЕ ОКРАШИВАНИЕ
КРАСКОЙ МАТРИКС СОКОЛОР

Нанесите весь приготовленный состав на волосы — от корней до кончиков.
Время воздействия красителя — 30-45 минут, в зависимости от желаемой
интенсивности цвета. Время считается с момента полного нанесения смеси
на волосы.

ВТОРИЧНОЕ ОКРАШИВАНИЕ
КРАСКОЙ МАТРИКС СОКОЛОР

Нанесите Соколор Бьюти только на прикорневую зону с отросшими волосами.
Оставьте для окрашивания на 15-20 минут (половина от общего времени
окрашивания). Распределите краситель по всей длине и выдержите вторую
половину времени.

Пример использования
Матрикс Соколор Бьюти на ранее окрашенных волосах, оттенок 10P +
окислитель 3%:

Во время действия красителя не используйте на волосах металлические
зажимы и не пользуйтесь металлическими расческами. Руки защищайте
защитными перчатками даже во время ополаскивания.

Для ополаскивания используйте шампунь и кондиционер. Шампунь лучше
выбрать также из салонных продуктов, он поможет остановить действие
красителя и восстановить баланс кожи.

}При обесцвечивании волос обычным составом выделяющийся из перекиси кислород, активно реагируя с пигментом, превращает его в бесцветное вещество.

При окрашивании красками тот же кислород, окисляя основу красителя, переводит ее из бесцветного растворимого состава в плохо растворимое в воде вещество определенного цвета, которое, собственно, и является краской, окрашивающей волосы. Перекись водорода, открывая кератиновые чешуйки наружного слоя и разрушая пигмент, дает возможность красителю проникнуть внутрь волоса, где краситель окисляется, значительно увеличиваясь в объеме и заполняя все пустоты волоса, который, в свою очередь, принимает цвет заполняющей его краски. Излишек краски, окислившейся вне волоса, легко смывается мылом, подкисленное ополаскивание закрывает чешуйки наружного слоя. И процесс получения прочной окраски можно считать законченным.

Чтобы успешно окрасить волосы окислительным красителем, необходимо очень точно, с помощью мензурки дозировать окислитель. Только в этом случае его применение даст хороший результат. Если окислитель не строго дозирован (например, окислителя меньше), краска получит меньшее количество кислорода и не сможет окислиться полностью. Если окислителя больше, чем необходимо, тон может получиться светлее.

По своему химическому строению окислительные красители очень разнообразны, в связи с чем при их применении необходимо учитывать многие факторы.

В принципе окрашивающая смесь содержит основу красителя (интермедиатор
), модификаторы
и стабилизаторы
. Интермедиаторы окисляются до хинонов, которые и окрашивают волосы. Модификаторы и стабилизаторы не участвуют в процессе окисления, но регулируют отдельные фазы этого процесса. Если интермедиаторы использовать самостоятельно, то полученные тона не имеют естественного вида и часто быстро бледнеют. При комбинации различных интермедиаторов с модификаторами и стабилизаторами получается целостная серия естественных и устойчивых тонов.

В качестве модификаторов и стабилизаторов употребляют метадиамины, резорцин, пирокатехины, пирогалол, диаминоанизол, диаминофенол и др. Получаемые с их помощью красители дают стабильный цвет. Модификаторы используют в небольших количествах, которых достаточно для получения желаемого эффекта, поэтому их иногда называют нюансаторами красителя.

Препараты для окраски волос выпускают в виде кремов, геля, жидкости и шампуней. На окрашивающий эффект краски для волос влияет формообразующее средство, которое должно обладать свойством растворять интермедиатор. Основным формообразующим средством краски для волос обычно является эмульсия, содержащая водную фазу, масляную фазу и эмульгатор. Для растворения интермедиатора используют главным образом изопропиловый спирт и пропиленгликоль. В состав включаются также оливковые мыла или другие поверхностноактивные вещества, которые являются дополнительными средствами, способствующими процессу растворения. Важно правильно подобрать формообразующее средство так, чтобы его рН имел значение 9-10,0, что обеспечивало бы условия, необходимые для набухания волос.

Любая смесь для окрашивания волос имеет индивидуально-оптимальное значение рН. Даже незначительные отклонения от этого значения приводят к изменению цветового тона. Для ощелачивания среды обычно используется 1-2%-ный раствор аммиака, который летуч и не раздражает кожи головы. Он может быть замещен триэтаноламином.

В качестве вспомогательных веществ, играющих защитную роль в препаратах для окрашивания волос, используют цетиловый спирт, производные целлюлозы, альгинаты, гуму трагаканту и др. Они являются основными составляющими краски для волос, имеющей форму геля.

Окислительные краски для волос в принципе состоят из 2 составляющих. Одна, основная, представляет собой раствор активных элементов красителя и вторая (вспомогательная) — окислитель. В качестве последнего наиболее часто применяют 5-6%-ный раствор перекиси водорода или такие соединения, как хлораты или броматы. Перед употреблением эти две составляющие смешиваются, между ними происходит реакция, в результате которой происходит окрашивание волос.

Концы волос всегда более гигроскопичны, следовательно, и время воздействия на них краски всегда меньше. Это положение распространяется на окраску любых волос какими угодно красителями, но особое значение приобретает при закрашивании отросших после прошлой окраски седых волос.

Этапы окраски волос окислением:

♦ нанесение краски на волосы;

♦ разбухание волоса;

♦ проникание краски внутрь волоса;

♦ соединение окислителя с натуральным пигментом;

♦ осветление натурального пигмента волос;

♦ небольшое осветление красящих телец;

♦ полное проявление краски.

С точки зрения технологии окрашивание волос обычными красками и профессиональными – в корне два разных процесса. В случае с «домашним» окрашиванием при помощи обычной краски не придется ломать голову над тем, как разводить краску для волос с окислителем. Не будет волновать и вопрос, как выбрать окислитель для краски. Для волос, окрашиваемых в домашних условиях, нет практически никакого риска приобрести не тот оттенок, ведь в упаковке идут четко дозированные ингредиенты для покраски. Другое дело с красками профессиональными – необходимые пропорции придется определять самостоятельно.

Качественный окислитель для волос: как выбрать?

Выбирать его стоит на том же этапе, когда вы покупаете краску. Важно сразу брать ингредиенты одного производителя (например, окислители для краски для волос Эстель, Гарньер и др.), чтобы результат не оказался плачевным, или как минимум – неожиданным. Главным фактором, определяющим силу окислителя, является уровень содержания в нем перекиси водорода. Выражают количество этого ингредиента в процентах: от 1,8 до 12%.

Важно заметить: наиболее щадящий окислитель тот, в котором перекиси водорода меньше 2%. В таком случае он выполняет сугубо одну функцию – помогает красящему пигменту плотно «лечь» на волосы, никак не влияя на тон краски. И наоборот – если перекиси водорода в окислителе много, он дополнительно обесцвечивает изначальный тон волос. В итоге одним и тем же красителем, но с окислителем разной концентрации – низкой и высокой – можно получить разный цвет волос: темнее и светлее соответственно.

У каждого производителя в инструкции обязательно прописано, какие пропорции краски для волос и окислителя необходимо смешать для достижения цвета, заявленного на упаковке.

А вот основные подсказки по содержанию перекиси в окислителе:
• оттенок тон в тон: 3%-й окислитель;
• оттенок на один тон светлее: 6%-й;
• оттенок на два тона светлее: 9%-й;
• оттенок на три тона светлее: 12%-й.

Дополнительно к краске и окислителю могут использоваться также микстона. Они идут как вспомогательные ингредиенты, способствующие выравниванию тона или приданию волосам дополнительного оттенка. Так, для более яркого результата количество микстона должно приравниваться к ¼ (например, на 60 г краски идет 15 г микстона). Для нейтрализации нежелательного оттенка и вовсе берут микстон и окислитель в соотношении 1:1, например – 30 г микстона и 30 г 3% окислителя для краски, для волос будет полезным и 30 г шампуня в составе данной смеси.

Как разводить краску для волос с окислителем

Прежде чем мы обратим ваше внимание на необходимые для качественного окрашивания компоненты, напомним о вот таком моменте: краска для волос без окислителя не существует. И не стоит даже думать о том, чтобы сэкономить или уклониться от дополнительного травмирующего процесса для волос, который происходит за счет окислителя. Вы поймите: ингредиенты краски, попадая на волос, разрыхляют его, и внутрь волоса проникает пигмент, но он не будет визуально заметен, если перекись водорода из окислителя не проявит его. Поэтому окислитель – не просто прихоть маркетологов или парикмахеров, это крайне необходимое средство для качественного и в целом правильного окрашивания волос.

А теперь – о технологии смешивания краски для волос и окислителя. Обзаведитесь фарфоровой или стеклянной мисочкой и такой же ложечкой (можно пластмассовые), целлофановыми или резиновыми перчатками. Да, зачастую производители кладут в упаковку все необходимое для окрашивания в домашних условиях, и тюбик для красящих веществ соответствующей формы. Однако в профессиональных кругах мастера используют все же выше указанные реквизиты – мисочку с ложечкой. И это, поверьте, практичнее. Например, если добавить в краску для волос окислитель, а соотношение получится не тем, в любой момент можно долить в мисочку недостающее количество того или иного ингредиента. При этом нельзя добавлять всего «на глаз», под рукой должны быть весы, или по крайней мере – четкая инструкция с обязательным строгим следованием ее пунктам.
Как только будут достигнуты необходимые пропорции краски для волос и окислителя, готовую смесь следует тут же нанести на волосы, без промедления.

Как развести краску для волос

Как получить нужный оттенок

Для окраски волос в домашних условиях вам потребуется:

• краситель и окислитель
• перчатки
• стеклянная палочка для смешивания красящего состава
• неметаллическая емкость для смешивания

При окрашивании волос необходимо использовать ингредиенты только одного производителя

В коробке с краской, предназначенной для домашнего использования, окислитель, или оксидант, и красящий состав расфасованы в разные упаковки. Вам остается только смешать их по прилагаемой инструкции в посуде и нанести на волосы.

В коробке с профессиональной краской вы найдете только тюбик с красителем, а окислитель продается отдельно. При этом он бывает разной кондиции – от 3 до 12%. Чем больше процент, тем больше количество перекиси водорода присутствует в окислителе. В зависимости от количества краски и окислителя той или иной концентрации можно получить разный оттенок волос после окрашивания.

Краску следует наносить на волосы сразу же после смешивания и не держать ее дольше времени, указанного в инструкции

Натуральная краска для волос – хна и басма. Правила смешивания и технология окрашивания

Обычно при окрашивании в чистые яркие натуральные цвета соотношение красителя и окислителя составляет 1:1. Если вы окрашиваете волосы тон в тон или хотите, чтобы нужный оттенок был на тон светлее, используйте 6%-ный окислитель. Для получения оттенка на два тона светлее заявленного вам потребуется то же количество 9%-ного окислителя, на три тона – 12%-ного.

Если вы не хотите обращаться в парикмахерский салон и собираетесь покрасить волосы самостоятельно, необходимо не только правильно развести краску, но и учесть еще некоторые нюансы. Например, окислители для аммиачных красок и безаммиачных красок для волос – это совершенно разные препараты, не заменяющие друг друга. Важно учесть при разведении краски и принципы колористики.

Для чего нужны законы колористики

Если взглянуть на ваши волосы при солнечном освещении, будет заметен их родной, натуральный оттенок. У кого-то волосы отливают красным, у кого-то – желтым, а у кого-то будет виден даже синий оттенок.

При смешивании искусственного пигмента красителя с натуральным пигментом ваших волос может получиться довольно неожиданный результат, далекий от нужного

Необходимо знание некоторых основ колористики, чтобы подобрать правильный микс-тон для краски нужного оттенка. Если ваш натуральный оттенок красноватый, вам нужно выбирать краски зеленоватого тона, от ненужной желтизны можно избавиться с помощью окрашивания в фиолетовые тона, красноватый оттенок красителя усилит яркость выбранного тона, а краски синих и пепельных тонов, наоборот, сделают его тускловатым, пастельным. Если вы сами не сможете определиться с нужным вам тоном, обратитесь за советом к профессионалам в парикмахерскую.

В некоторых случаях меняя краску для волос с привычного бренда на новый вариант можно не рассчитать пропорции. Если нет окислителя, существует несколько способов разбавить смесь, чтобы было больше красящего вещества. Возникает вопрос: чем развести профессиональную краску без потери ее качества. Есть несколько простых приемов, которыми давно пользуются опытные пользователи.

Чем разводить краску?

В случае если не хватает красящей суспензии можно прибегнуть к разбавлению несколькими средствами, которые есть в каждом доме. Самый простой способ разводить ее водой. Концентрированную суспензию наносят на корни. Остатки разбавляют небольшим количеством воды, пульверизатором наносят на локон. Мягкими движениями помассировать всю копну.

Растворить краску до нужного объема можно:

• шампунем;
• бальзамом.

Большинство источников предлагают соотношение 2:1. В котором две части относятся к краске, а одна порция шампуня или бальзама. Добавление бальзама смягчает действие красок. Некоторые марки эмульсий становятся на пол тона светлее, по этой причине необходимо обращать внимание на процентное содержание аммиака. Краски с низким содержанием изменяют цветность в сторону осветления оттенка.

Как реагируют покупные краски на разбавление

Чтобы получить стойкий эффект от разбавленного красящего вещества необходимо учитывать особенности химического содержания краски. В случае, когда суспензии оказалось мало, приходится прибегать к вспомогательным приемам. При этом следует учитывать реакцию краски.

Смешивать с бальзамом без потери цветности можно следующие марки краски:

• Эстель;
• Капус;
• Матрикс;
• Игора;
• Лонда;
• Колестон.

Равномерное распределение суспензии по все длине волос даст стойкий эффект подкрашивания. Правильно подобранная пропорция шампуня и красящего вещества позволит закончить процесс обновления цвета. С шампунем можно перемешивать марки:

• Делюкс;
• Кутрин;
• Оллин;
• Лореаль;
• Велла;
• Keen.

Восстанавливающие шампуни Kapous, Kerasys, Constant Delight, Kensuko – Thevolosy

На сегодняшний день многие женщины сталкиваются с проблемой выпадения волос. Не секрет, что за последнее время иметь здоровые локоны – это большая роскошь. Из-за вызванных определенных природных явлений и факторов пряди теряют свою жизненную природную силу. Поэтому необходимо подобрать правильный комплексный уход.

На самом деле восстановить поврежденные локоны не так уж и просто. В первую очередь необходимо выявить причину и, соответственно, приступить к эффективному лечению. Например, специалисты выявили основные причины, которые повреждают корни и кончики волос. В основном на волосяные фолликулы негативно воздействуют следующие факторы:

• перепад температуры,
• смена климата,
• частое ношение головного убора,
• сниженный иммунитет,
• неправильное питание,
• стрессовые ситуации,
• частое мытье головы,
• использование утюга, фена или других горячих устройств.

То есть все эти факторы могут вызывать обезвоживание кожи головы. Соответственно, через некоторое время локоны становятся тусклыми, безжизненными и склонными к интенсивному выпадению. Появляться в обществе с несвежими прядями – это очень некрасиво. Поэтому многие женщины впадают в панику. Однако в этой статье мы поделимся всеми секретами. Вы узнаете, какими средствами правильно пользоваться и как нужно восстановить поврежденные локоны самостоятельно в домашних условиях.

Вредные привычки

Чаще всего в современном мире модницы регулярно окрашивают шевелюру. Всем известно, что щадящие краски и другие средства повреждают структуру волос. К сожалению, не многие придают этому фактору огромное значение. Многие дамы, которые могут позволить себе регулярно посещать салон красоты, конечно же, бережно ухаживают за своими прядями.

Однако стоит учесть, что правильный уход требует немалых средств. Но не все могут позволить себе такое роскошное удовольствие. Поход в парикмахерскую стоит немалых денег. Поэтому в этой статье мы детально разберем, как можно самостоятельно восстановить безжизненные пряди в домашних условиях.

Первый вариант

При наличии волос соломенной структуры, в свою очередь, с секущими кончиками для начала нужно сходить в парикмахерскую и подстричь свои локоны. Таким образом можно более или менее придать своим поврежденным кончикам здоровый вид. Желательно отрезать более четырех сантиметров. Но если вы не хотите укоротить длину прядей, тогда нужно попросить парикмахера отрезать лишь небольшое количество сухих и в то же время поврежденных кончиков волос.

Для того чтобы не усугубить ситуацию и не привлечь более серьезные последствия, лучше отказаться от сушки феном. Только таким образом можно сохранить здоровые локоны. Желательно не пользоваться продуктами, в которых содержится химический состав. Поврежденные пряди могут выпасть после нанесения неких средств.

Второй метод

По утверждению специалистов, необходимо прекратить использование теплоты. После того как стрижка будет сделана, не нужно делать укладку феном или выпрямителем. Тепловая обработка вредит даже здоровым локонам. На самом деле многие парикмахеры советуют воздерживаться от употребления щипцов, выпрямителей и других устройств.

Рекомендовано проводить сушку прядей натуральным и естественным способом. Намного лучше использовать только фен. При восстановлении поврежденных локонов нежелательно пользоваться горячими устройствами — в худшем случае результат не будет эффективным. Для завивки или выпрямления волос необходимо воспользоваться только бигуди.

Третий метод

Если вы собираетесь отбелить свои локоны, то не следует пользоваться химическими средствами. Смена цвета – это нанесение стресса волосам. Отбелив или покрасив поврежденные пряди, можно столкнуться с тяжелыми серьезными последствиями. Через несколько дней волосы выпадут и станут ломкими. А для восстановления понадобится потратить немало средств и усилий.

Даже при глубоком конденцировании, которое предназначается исключительно для увлажнения и восстановления волос, в средствах могут содержаться далеко не все питательные и полезные компоненты. Для контролирования процесса нужно отказаться от дорогостоящих лечебных процедур, которые предлагают в некоторых салонах.

Советы специалистов

Пришло время распрощаться с некоторыми средствами, которые негативно воздействуют на вашу шевелюру. На сегодняшний день достаточно огромное количество косметики для волос представлено на рынке. Многие производители конкурируют друг с другом и регулярно выпускают средства с некоторыми добавками. Некоторые девушки и женщины сразу же обращаются к консультантам и приобретают неподходящие химические шампуни, бальзамы, ополаскиватели и маски, которые, в свою очередь, ухудшают состояние окрашенных локонов. Поэтому шампуни, ополаскиватели, кондиционеры и другие средства, изготовленные на основе натуральных масел, могут запросто решить возникшую проблему.

Для начала нужно учесть, что кондиционера с преобладанием лаурила или лауреата сульфата надо избегать. Подобное моющее средство доступно практически в каждом магазине. Стоит отметить, что этим средством можно, конечно же, очистить свои локоны и кожу головы, но в результате волосы лишаются натурального и естественного вида.

Лаки, гели, муссы и другие препараты не рекомендовано применять регулярно. Во всех этих средствах содержатся химические вещества. Чтобы избежать негативных последствий, лучше приобрести все выше перечисленные продукты с добавками питательных ингредиентов. Прекрасная альтернатива – это изготовление лака для локонов собственными руками. При этом нужно всего лишь воспользоваться цитрусами, смесью воды и желатином.

Не стоит забывать об эффективном лечении с помощью различных полезных масел. В этом случае можно использовать как оливковое, так и репейное. Для того чтобы напитать корни и кончики волос эффективным маслом, нужно несколько капель нанести на руки и медленными движениями втереть пальцами в кожу головы. Масло нужно оставить на голове в течение пятнадцати минут. Далее придется смыть теплой водой.

Слишком частое мытье окрашенных волос приводит к интенсивному выпадению. Как утверждают профессиональные стилисты, голову желательно мыть всего лишь 2 раза в неделю. Если у вас сухие пряди, тогда перед принятием душа можно надеть головной убор или собрать шевелюру в пучок.

Если правильно действовать по правилам, то можно быстро и легко излечить свои поврежденные волосы за короткий промежуток времени. Теперь мы расскажем, какие средства нужно применять для увлажнения и восстановления поврежденной шевелюры. Всем известно, что на рынке появилось огромное количество средств, которые эффективно воздействуют на структуру волос. Поэтому, чтобы не ошибиться в выборе, предлагаем детально ознакомиться с профессиональными продуктами. Например, такими как Kapous с гиалуроновой кислотой, Kerasys, Constant Delight с аргановым маслом, «Индола» с кератином, «Дав», Kensuko, «Матрикс» и другие.

• Наиболее эффективным считается шампунь Kapous с гиалуроновой кислотой. Новая серия итальянской марки восстанавливающего шампуня Kapous с гиалуроновой кислотой представлена практически во всех аптеках и магазинах. Этот продукт отлично подойдет обладательницам сухих волос. Женщины, которые предпочитают сушить шевелюру феном или пользуются другими горячими устройствами, выбирают косметику для волос от производителя Kapous с гиалуроновой кислотой. Это средство бережно сглаживает тяжелые, а также ломкие кончики прядей.

Если вы ищите эффективный шампунь для увлажнения сухих волос, тогда Kapous с гиалуроновой кислотой – это наилучшее альтернативное решение для каждого покупателя. Разработанная нежная формула позволяет защищать волосы от негативного воздействия окружающей среды. Шампунь Kapous с гиалуроновой кислотой отлично справляется со своей функцией и, конечное же, очищает кожу головы и пряди от загрязнения.

Стоит отметить, что профессиональный и восстанавливающий шампунь Kapous с гиалуроновой кислотой можно применять для ежедневного мытья. Приятный аромат сохраняется на протяжении сорока восьми часов. После неоднократного использования шампуня Kapous с гиалуроновой кислотой локоны становятся мягкими, послушными и естественными. Следует знать, что Kapous с гиалуроновой кислотой хорошо пенится. Смыть Kapous с гиалуроновой кислотой нужно теплой водой и затем высушить волосы феном или, лучше всего, естественным путем.

• Если вы все еще не определились с выбором и находитесь в поисках качественного шампуня для сухих волос, то опытные парикмахеры предлагают воспользоваться продуктом Kerasys. Важно знать, что средство Kerasys содержит состав «два в одном», то есть выполняет функцию не только шампуня, но и кондиционера. Производителем косметических средств Kerasys является Корея. Всем известно, что корейская косметика пользуется огромной популярностью в последнее время среди представительниц женского пола.

При сильном повреждении волос Kerasys надежно очищает кожу головы, устраняет перхоть и придает естественный и натуральный блеск. Производитель Kerasys выпускает линию косметики для волос в соответствии со всеми международным стандартам. Перед тем как продукция поступает на продажу, квалифицированные специалисты проверяют содержание компонентов. Поэтому Kerasys является одним из лучших средств по уходу за локонами. Цена шампуня Kerasys с кератином довольно демократична. Поэтому каждая жительница в нашей стране может позволить себе качественный и профессиональный продукт Kerasys для всех типов волос.

• Итальянские производители знают толк в эффективном уходе за волосами. Поэтому известная компания выпустила качественный шампунь Constant Delight с аргановым маслом. Разработанная формула Constant Delight РН предназначается для чувствительных локонов. При нанесении нескольких капель средства Constant Delight с аргановым маслом пряди становятся мягкими, объемными и естественными.

С помощью эффективного средства Constant Delight с аргановым маслом за короткий промежуток времени восстанавливается гидролипидный баланс шевелюры. Стоит отметить, что Constant Delight с аргановым маслом применяется для ослабленных и окрашенных локонов. Профессиональный продукт Constant Delight с аргановым маслом эффективно воздействует на поврежденные волосы и восстанавливает волосяные фолликулы, в результате чего Constant Delight стимулирует рост здоровых прядей и уменьшает процесс выпадения волос. Шампунь Constant Delight рекомендовано использовать наряду с другими средствами для восстановления и увлажнения локонов. Если вы хотите приобрести коллекцию средств Constant Delight, то можно зайти на официальный сайт и выписать новинку продукции.

• Первое место на рынке занимает серия средств по уходу за волосами «Индола» с кератином». Важно подчеркнуть главный факт, что очищающее средство «Индола» с кератином» используется для различных типов волос. Этот препарат («Индола» с кератином») необходимо применять как один из пяти шагов процедуры кератинового выпрямления локонов. Новая инновационная формула содержит кератин-полиер, соответственно, пряди покрываются защитной оболочкой.

Благодаря продукту «Индола» с кератином» вьющиеся локоны выпрямляются и становятся мягкими. Чтобы использовать кератиновый комплекс для выпрямления волос, желательно приобрести все средства серии «Индола» с кератином» (маску, кондиционер, бальзам, шампунь и, конечно же, масло). Важно знать, что шампунь «Индола» с кератином» необходимо наносить на слегка увлажненные пряди. Препарат «Индола» с кератином» можно использоваться ежедневно.

• Новая коллекция косметики для волос от Kensuko предлагает профессиональные и качественные средства. Благодаря профессиональной линии Kensuko можно обеспечить волосам бережный комплексный уход. Шампунь Kensuko с кератином используют во многих парикмахерских. Поэтому стилисты рекомендуют своим клиентам мыть голову именно шампунем марки Kensuko.

Стоит отметить, что Kensuko пользуется популярностью не только у нас в стране, но и во многих других европейских странах. Бережно очищающее средство Kensuko борется с перхотью и избавляет кожу головы от зуда и раздражения. Профессиональная косметика для волос Kensuko китайского производства очень экономична, и цена, соответственно, доступна.

• Стоит также не обделить вниманием профессиональный шампунь производителя «Матрикс». Многие в нашей страны ежедневно делают укладки и в том числе используют различные муссы, лаки, которые повреждают структуру волос. Поэтому инновационная продукция от «Матрикс» предназначена для быстрого восстановления поврежденных кончиков и корней.

«Матрикс» широко известен в нашей стране. Из-за доступной стоимости все жители могут позволить себе линию косметики для волос. Почти все уходовые средства «Матрикс» можно приобрести в любых аптеках и магазинах. Поэтому, если вы хотите восстановить пряди в домашних условиях за кратчайший срок, тогда приобретите эффективный шампунь по низкой стоимости.

• Косметика «Дав» распространена по всему миру. Не секрет, что косметические средства от производителя «Дав» оказывают эффективное воздействие на поврежденную структуру. Интенсивную терапию с помощью косметики серии «Дав» можно провести самостоятельно в домашних условиях. С помощью эффективного шампуня «Дав» волосы восстанавливаются за несколько недель.

Кератин с гиалуроновой кислотой /Увлажняем окрашеные волосы

границ | Бесклеточные внеклеточные матричные биоскаффолды для восстановления и регенерации сердца

Введение в сердечную недостаточность

По данным Американской кардиологической ассоциации (AHA), ожидается, что распространенность застойной сердечной недостаточности (ЗСН) увеличится на 46% с 2012 по 2030 год, при этом ежегодно регистрируется ошеломляющее 960 000 новых случаев ЗСН (Benjamin et al., 2017). ЗСН — это прогрессирующее состояние, при котором насосная функция сердца со временем ухудшается. Сердечная недостаточность часто является проявлением ишемического повреждения сердца, вызванного инфарктом миокарда (ИМ) (Velagaleti et al., 2008). После инфаркта миокарда происходит структурное перестройка миокарда (Sutton, Sharpe, 2000; Fedak et al., 2005a, b). Первоначально структурное ремоделирование сердца является адаптивным с целью предотвращения разрыва свободной стенки желудочка. Однако длительное структурное ремоделирование сердца приводит к необратимой сердечной недостаточности из-за прогрессирующей потери сердечной функции (Fedak et al., 2005a, b). Ухудшение функции сердца является следствием фиброза миокарда, истончения стенок и дилатации левого желудочка (ЛЖ) (Fedak et al., 2005а, б; Fraccarollo et al., 2012; Xie et al., 2013).

Лечение сердечной недостаточности и биоскаффолд

Существует множество фармакологических вмешательств, включая антиангинальные препараты, такие как бета-блокаторы, которые могут использоваться для улучшения симптомов и прогноза у пациентов с сердечной недостаточностью. Однако одна фармакотерапия не может вызвать функциональное восстановление инфаркта миокарда (McDonald et al., 2017; Patel et al., 2017). Реваскуляризация инфаркта миокарда в настоящее время достигается либо с помощью операции по шунтированию коронарной артерии (АКШ), либо с помощью чрескожного коронарного вмешательства (ЧКВ).Хотя эти подходы показаны для снижения заболеваемости и смертности, они не могут предотвратить прогрессирующий кардиальный фиброз и структурное ремоделирование, которое приводит к терминальной стадии сердечной недостаточности (McDonald et al., 2017). CREDO-Kyoto (Исследование результатов коронарной реваскуляризации в Киото) — это трехлетнее исследование результатов когорты регистратур ЧКВ / АКШ. Выявлено, что из 392 пациентов, перенесших АКШ, 12% были повторно госпитализированы по поводу сердечной недостаточности, а 4% потребовалась повторная реваскуляризация. Аналогичным образом, из 672 пациентов, перенесших ЧКВ, 22% были повторно госпитализированы по поводу сердечной недостаточности, а 19% потребовалась повторная реваскуляризация (Marui et al., 2014).

В прошлом инженерия сердечно-сосудистой ткани фокусировалась на использовании подхода на основе стволовых клеток или генной терапии в качестве решения для восстановления сердечной функции после перенесенного инфаркта миокарда. Однако путь к клиническому воплощению этих подходов в значительной степени был сопряжен с проблемами, особенно с неопределенностью в отношении клинической эффективности и осуществимости (Balsam et al., 2004; Murry et al., 2004; Gyöngyösi et al., 2015; Kaiser, 2018; Рирдон, 2018). Биоэкафолды бесклеточного внеклеточного матрикса (ECM) — это новое и инновационное решение, которое исследуется в качестве дополнительной терапии к хирургической реваскуляризации поврежденного миокарда (Mewhort et al., 2014, 2016b, 2017; Park et al., 2017; Свистонюк и др., 2018). Эти бесклеточные биоскатники внеклеточного матрикса могут содержать ключ к раскрытию потенциала эндогенных механизмов восстановления и регенерации тканей в месте инфаркта миокарда. Обеспечивая необходимые экологические сигналы, конечная цель бесклеточной терапии биоэкофольдом внеклеточного матрикса состоит в том, чтобы способствовать функциональному восстановлению поврежденного миокарда. В этом обзоре мы приводим краткое изложение бесклеточных биопокрытий внеклеточного матрикса, используемых в настоящее время и разрабатываемых для использования в кардиохирургии.Лучшее понимание этой многообещающей терапевтической стратегии может облегчить ее внедрение в клиническую практику.

Центральная роль сердечного фибробласта

Нашу исследовательскую группу особенно интересует центральная роль, которую сердечный фибробласт играет в дезадаптивном структурном ремоделировании сердца и прогрессировании сердечного фиброза (Mewhort et al., 2014, 2016a, b, 2017; Svystonyuk et al., 2015, 2018; Teng et al., 2015; Park et al., 2017). Сердечные фибробласты, являясь одним из преобладающих типов клеток, не являющихся кардиомиоцитами, из которых состоит сердце, вносят вклад в структурные, механические, биохимические и электрические свойства сердца (Camelliti et al., 2005; Souders et al., 2009). Реагируя на изменения в микросреде, сердечные фибробласты играют ключевую роль в поддержании гомеостаза ВКМ, напрямую изменяя синтез и деградацию компонентов кардиального ВКМ (Fedak et al., 2005a, b; Krenning et al., 2010; Fan et al. ., 2012). Поддержание и регулирование ECM имеет важное значение, поскольку он формирует структурную сеть, которая поддерживает и соединяет сердечные клетки. Кроме того, биохимическая роль сердечных фибробластов дополнительно влияет на сердечную функцию, поскольку они секретируют широкий спектр факторов роста и регуляторных белков ЕСМ (Fedak et al., 2005а, б). Например, ангиогенез частично управляется паракринным взаимодействием между сердечными фибробластами и соседними эндотелиальными клетками, которое опосредуется фактором роста фибробластов-2 (FGF-2) и фактором роста эндотелия сосудов (VEGF) (Zhao and Eghbali-Webb, 2001). . Наконец, сердечные фибробласты также играют роль в установлении нормальной электрофизиологии сердца. Электрическое соединение сердечных фибробластов с кардиомиоцитами через белки канала щелевых соединений коннексин-43 и коннексин-45 было охарактеризовано in vitro (Camelliti et al., 2004; Махони и др., 2016). В случае ишемического повреждения и связанного с этим нарушения местного микроокружения инфаркта миокарда сердечные фибробласты активируются до состояния миофибробластов (Baum and Duffy, 2011; Dixon and Wigle, 2015; Рисунок 1). Активность миофибробластов вызывает дезадаптивное структурное ремоделирование сердца и фиброз за счет нарушения регуляции гомеостаза ВКМ и нарушения локальной биоактивной среды, включая факторы роста и цитокины (Fedak et al., 2005a, b; Krenning et al., 2010; Диксон и Вигл, 2015).

Рисунок 1. Сердечный фибробласт человека (слева) в сравнении с сердечными миофибробластами человека, активированными TGF-β (справа). Миофибробласты больше по размеру клеток, имеют увеличенное количество разрастаний клеток и увеличенную длину разрастаний клеток. Экспрессия альфа-актина гладких мышц (α-SMA), а также продукция и отложение коллагена (коллаген, желтый) увеличиваются в сердечных миофибробластах человека по сравнению с сердечными фибробластами человека. Окрашивание Hoechst используется для визуализации ядер клеток (ядра, синий цвет).Изображения любезно предоставлены доктором Гуоци Тенг из Университета Калгари.

Миофибробласт-опосредованное ремоделирование внеклеточного матрикса

В частности, инфарктный миокард подвергается трехэтапному процессу заживления ран: (1) воспалительная стадия, (2) стадия пролиферации и (3) стадия созревания (рис. 2). Первоначально воспалительная стадия характеризуется гибелью кардиомиоцитов и эндотелиальных клеток, привлечением иммунных клеток и увеличением провоспалительных цитокинов (Dobaczewski et al., 2010b; Шинде и Франгогианнис, 2014; Саксена и Франгогианнис, 2015). На этой стадии сердечные фибробласты приобретают провоспалительный фенотип и способствуют воспалению за счет продукции различных цитокинов (IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-8 и TNF-α) (Kawaguchi et al., 2011; Fan et al., 2012; Shinde, Frangogiannis, 2014). Затем пролиферативная стадия отмечена дифференцировкой сердечных фибробластов по фенотипу миофибробластов и миграцией в область инфаркта миокарда (Shinde and Frangogiannis, 2014; Рисунок 2).Этот сдвиг может быть вызван повышением уровня трансформирующего фактора роста бета (TGF-β), фибронектина ED-A и механическим стрессом (Serini et al., 1998; Lee et al., 1999; Vaughan et al., 2000; Tomasek et al., 2002; Zhao et al., 2007; Dobaczewski et al., 2010a; Shinde, Frangogiannis, 2014; рисунок 1). Миофибробласты характеризуются повышенной экспрессией альфа-актина гладких мышц (α-SMA) (рис.1), что соответствует повышенной сократимости и манипуляции с окружающей средой внеклеточного матрикса (Leslie et al., 1991; Арора и Маккалок, 1994; Hinz et al., 2001). Миофибробласты также обнаруживают измененную матричную металлопротеиназу (ММП) и тканевые ингибиторы продукции матриксных металлопротеиназ (ТИМП) (Fedak et al., 2005b). Измененная экспрессия этих ECM-регуляторных белков приводит к чистому отложению коллагена типа I вместе с другими белками ECM (Brown et al., 2005; Heymans et al., 2005). Наконец, целью стадии созревания является формирование рубцовой ткани, при которой повышенное отложение ВКМ необходимо для образования коллагенового рубца и предотвращения разрыва свободной стенки желудочка в месте инфаркта миокарда (Camelliti et al., 2005; Souders et al., 2009; Фигура 2). Именно таким репаративным образом активность миофибробластов и структурное ремоделирование сердца являются первоначально адаптивными.

Рисунок 2. Развитие заболевания после инфаркта миокарда. Инфарктный миокард проходит трехэтапный процесс заживления ран: (1) стадия воспаления, (2) стадия пролиферации и (3) стадия созревания, что приводит к дезадаптивному структурному ремоделированию сердца. Вмешательство с использованием бесклеточной терапии биоэкапсином внеклеточного матрикса может быть использовано для ослабления активации миофибробластов, стимулирования проангиогенного ответа и ограничения разрастания рубца.

Однако стойкая активация миофибробластов в конечном итоге приводит к неадаптивному утолщению и расширению рубца, результатом чего является механическая жесткость, систолическая и диастолическая дисфункция и прогрессирующий кардиальный фиброз (Рисунок 2). Региональные и временные изменения сократимости миокарда после ишемического повреждения сердца позволяют дифференцировать локальную область ИМ от окружающей пограничной зоны и удаленной непораженной ткани миокарда (Jackson et al., 2002; Park et al., 2006; Шимкунас и др., 2013; Аруначалам и др., 2018; Торрес и др., 2018). В частности, пограничная зона представляет собой нормально перфузируемую область гипоконтрактильности, где, как было показано, сократимость снижена на 50% по сравнению с таковой удаленной непораженной зоны in vivo , и играет центральную роль в распространении инфаркта (Jackson et al. al., 2002; Blom et al., 2007; Shimkunas et al., 2011; Richardson, Holmes, 2015). В целом систолическая и диастолическая дисфункция, возникающая из-за нарушения сократимости миокарда, способствует ухудшению насосной функции сердца и может привести к клинической терминальной стадии сердечной недостаточности.Характеристика сердечной ткани, полученная от пациентов, перенесших трансплантацию сердца в результате клинической терминальной стадии сердечной недостаточности, выявила снижение количества кардиомиоцитов ЛЖ на 36% и сопутствующее увеличение содержания коллагена в этой области на 28% (Beltrami et al., 1994 ). Кроме того, объем камеры ЛЖ увеличен в 4,6 раза в сочетании со снижением на 56% отношения массы ЛЖ к объему камеры (Beltrami et al., 1994).

Хотя активация сердечного фибробласта до состояния миофибробласта является центральной для нарушения регуляции сердечного ECM и последующего структурного ремоделирования сердца, важно отметить, что эти клетки не функционируют изолированно.Кардиомиоциты, эндотелиальные клетки и иммунные клетки также играют важную роль в определении структурных, механических, биохимических и электрических свойств сердца. Однако, как сторожевые клетки сердечного ВКМ, сердечные фибробласты отвечают на множество стимулов и модулируют функцию окружающих сердечных клеток (Baudino et al., 2006; Souders et al., 2009; Saxena and Frangogiannis, 2015). Следовательно, терапевтические решения, направленные на ослабление дезадаптивного структурного ремоделирования сердца, должны сначала сосредоточиться на опосредованном миофибробластами ремоделировании ВКМ.

Биоскаффолды внеклеточного матрикса как терапевтическое решение

Способность восстанавливать оптимальную микросреду ВКМ представляет собой терапевтическую возможность, с помощью которой можно повлиять на неадаптивное структурное ремоделирование сердца. Бесклеточные биопласты внеклеточного матрикса могут быть использованы для обеспечения необходимых сигналов окружающей среды для ослабления активации сердечных фибробластов, тем самым предотвращая чрезмерное расширение и утолщение рубцов, вызванных инфарктом. Эти биокаффолды могут также способствовать эндогенным механизмам репарации и регенерации, таким как ангиогенез или васкулогенез, благодаря своим биоиндуктивным свойствам (Mewhort et al., 2014, 2016b, 2017; Park et al., 2017; Свистонюк и др., 2018). В то время как ряд синтетических материалов каркаса также находится в разработке, этот обзор будет сосредоточен на бесклеточных биологических каркасах ВКМ, используемых или разрабатываемых для использования в кардиохирургии после ишемического повреждения. Состав и структура бесклеточных биокаффолдов внеклеточного матрикса зависят от физиологических потребностей ткани, из которой они получены. Поскольку здоровое сердечное ЕСМ-микроокружение представляет собой сложную среду, состоящую из компонентов ЕСМ, сердечных клеток, факторов роста, цитокинов и матрицеклеточных белков, очевидно, что биологический каркас ЕСМ может обеспечить дополнительные преимущества, поскольку он наилучшим образом приближается к этому сложному и разнообразному микроокружению ЕСМ.

Бесклеточные биоэкафолды ECM могут быть дифференцированы по (1) источнику ткани, из которого они получены, и (2) способу фиксации или его отсутствию, реализованному при обработке биоэкафолда ECM (Таблица 1). Бесклеточная подслизистая оболочка тонкой кишки свиней (SIS) и бесклеточные биопластинки внеклеточного перикарда (BP) из бычьего перикарда были центром клинических исследований для использования в кардиохирургии. Примечательно, что в то время как запатентованные методы фиксации глутаральдегида наиболее часто используются для фиксации или сшивания большинства биоскольцов, CorMatrix ^® не сшивается (не фиксируется), а PhotoFix ^TM сшивается с использованием опосредованной красителем фотографии. -окисление (таблица 1).Кроме того, в то время как методы и сложности, касающиеся децеллюляризации этих биоскаффолдов, выходят за рамки этого обзора, существует множество запатентованных методов для получения бесклеточных биоскаффолдов ЕСМ. Целью децеллюляризации является создание биоэкафолда ECM, происходящего из бесклеточной ткани, из которого были удалены антигенные эпитопы, связанные с клеточными мембранами и внутриклеточными компонентами; это сводит к минимуму возможность неблагоприятного иммуногенного ответа реципиентов биокаффолда (Badylak et al., 2015).

Таблица 1. Неполный список коммерчески доступных биопластов ECM для потенциального использования при восстановлении и регенерации сердца.

Биоскаффолды, полученные из бесклеточной подслизистой основы тонкой кишки

Наша исследовательская группа подробно охарактеризовала терапевтическое действие CorMatrix ^® — SIS-ECM (CorMatrix Cardiovascular, Inc., США) для восстановления сердца (рис. 3A). Поскольку тонкий кишечник является органом с высокой степенью васкуляризации, неудивительно, что SIS-ECM, как было показано, содержит важные проангиогенные факторы роста, включая FGF-2, VEGF и HGF (Badylak, 2002; Mewhort et al., 2017). In-vitro характеризация с использованием сердечных фибробластов человека продемонстрировала, что CorMatrix ^® способствует усилению FGF-2-зависимого клеточно-опосредованного проангиогенного ответа (Mewhort et al., 2017). Кроме того, CorMatrix ^® улучшает сборку новых кровеносных сосудов как in vitro, с использованием эндотелиальных клеток пупочной вены человека (HUVEC), так и in vivo с использованием модели ИМ крысы (Mewhort et al., 2017). Используя как модель инфаркта миокарда у крыс, так и доклиническую модель ишемии-реперфузии у свиней, наша исследовательская группа также показала, что восстановление инфаркта с помощью CorMatrix ^® снижает распространение инфаркта миокарда и вызывает функциональное восстановление (Mewhort et al., 2016б, 2017). В частности, хирургическая имплантация CorMatrix ^® размером в область инфаркта миокарда показала улучшение фракции выброса и тенденцию к улучшению податливости ЛЖ по сравнению с фиктивной, как измерено соотношением конечного диастолического давления и объема (EDPVR) (Mewhort et al. ., 2017).

Рисунок 3. Репрезентативные изображения трех биосклетов бесклеточного внеклеточного матрикса (вырезы 1,2 × 1,2 см). (A) CorMatrix ^® (CorMatrix Cardiovascular, Inc., США) подслизистая оболочка тонкой кишки свиньи (SIS), натуральная, регидратированная в физиологическом растворе (B) Peri-Guard ^® (Synovis Life Technologies, Inc., США) бычий перикард, сшитый глутаральдегидом, и (C) PhotoFix ^TM (Cryolife, Inc., США) бычий перикард, опосредованный красителем, сшитый фотоокислением.

Недавний систематический обзор первоначальных доклинических и клинических данных CorMatrix ^® подчеркивает терапевтический потенциал CorMatrix ^® , но также подчеркивает необходимость дальнейшего разъяснения его конкретных хирургических показаний (Mosala Nezhad et al., 2016). Например, проспективное многоцентровое клиническое исследование, включавшее 103 пациента, которым были имплантаты CorMatrix ^® (38 — восстановление клапана; 16 — реконструкция перегородки; 71 — артериальная пластика; 7 — другое применение), не обнаружило заметной кальцификации биопокрытия. пациенты при повторной операции, контрольной визуализации или среднесрочном гистологическом анализе после объяснения (Padalino et al., 2015). Поскольку кальцификация является основным недостатком фиксированных глутаровым альдегидом бесклеточных биокаффолдов внеклеточного матрикса, CorMatrix ^® демонстрирует значительные перспективы в преодолении этого препятствия для трансляции.Однако было показано, что CorMatrix ^® вызывает воспалительную реакцию, особенно в педиатрической популяции, подвергающейся митральной или аортальной вальвулопластике, которая может быть вызвана присутствием эпитопа α-gal свиньи (Zaidi et al., 2014; Rosario-Quinones et al. др., 2015). Также остается неясным, способен ли сам биоскаффолд к ремоделированию и интеграции в естественную сердечную среду (Zaidi et al., 2014; Padalino et al., 2015). Внекардиальные аппликации или аппликации в сердечной среде с низкой механической нагрузкой могут быть наиболее подходящим хирургическим показанием для CorMatrix ^® (Mosala Nezhad et al., 2016). Существует ценность в дальнейшем изучении клинического потенциала CorMatrix ^® , где более подробная гистопатологическая оценка эксплантированных биоскаффолдов может быть особенно полезной. Наша группа в настоящее время завершает первое пилотное испытание клинической осуществимости на людях (NCT02887768), в котором бесклеточная терапия ECM bioscaffold, CorMatrix ^® , хирургически имплантируется во время операции CABG.

Биоскаффолды, полученные из бесклеточного перикарда

Биоэкапфолды внеклеточного матрикса перикарда (BP) бычьего происхождения находят широкое применение в кардиохирургии, включая, помимо прочего, закрытие перикарда, восстановление и замену клапана, а также реконструкцию перегородки.Сшитые глутаральдегидом биопокрышки BP-ECM, такие как Peri-Guard ^® (Synovis Life Technologies Inc., США; рис. 3B), очень полезны в кардиохирургии благодаря своей предсказуемой и надежной природе (Schmidt and Baier, 2000; Данн, 2012). Однако существуют серьезные проблемы, связанные с фиксацией глутарового альдегида, включая кальцификацию, наличие воспалительной реакции и цитотоксическую природу самого глутаральдегида (Golomb et al., 1987; Dunn, 2012; van Steenberghe et al., 2017).

Появилось множество альтернативных стратегий для нейтрализации или удаления глутарового альдегида из поперечно сшитых биоскатей BP-ECM или для полной замены использования глутарового альдегида. PhotoFix ^TM (Cryolife Inc., США; рис. 3C) представляет собой биосколку BP-ECM, сшитую с использованием запатентованного метода фотоокисления, опосредованного красителем, в качестве альтернативы сшивке глутаральдегидом. PhotoFix ^TM оказался неиммуногенным и не кальцифицирующим по сравнению с аналогами, поперечно сшитыми глутаральдегидом in vivo , с использованием моделей крыс, кроликов и овец (Bianco et al., 1996; Мур и Филлипс, 1997; Мур и др., 1998). Кроме того, PhotoFix ^TM демонстрирует способность интегрироваться в естественную сердечную среду, поддерживая адгезию и миграцию клеток, о чем свидетельствует частичная эндотелиализация через два года после имплантации (Bianco et al., 1996; Moore and Phillips, 1997; Moore et al. др., 1998; Schmidt, Baier, 2000). Недавно было проведено ретроспективное исследование с участием 364 пациентов, средний возраст 5,3 года (диапазон от <1 месяца до 56 лет), которым были установлены имплантаты PhotoFix ^TM (место введения, 149 — выводящий тракт правого желудочка; 168 — легочная артерия; 21 — клапан. ремонт; 81 — реконструкция перегородки; 16 — реконструкция верхней полой вены; 26 — дуга аорты; 29 — прочее), обнаружено при контрольном осмотре 3.Через 2 ± 1,6 года после имплантации не было зарегистрировано летальных исходов, связанных с отказом биокаффолда PhotoFix ^TM (Baird et al., 2016). Более того, гистопатология эксплантированных биоскаффолдов PhotoFix ^TM выявила во многих случаях отсутствие или минимальное воспаление и кальцификацию (Baird et al., 2016). В настоящее время клинические преимущества PhotoFix ^TM в хирургии восстановления или реконструкции сосудов изучаются в рамках продолжающейся после выхода на рынок проспективной оценки клинического исследования PHOTO-окисленного перикарда крупного рогатого скота в сосудистой хирургии (PHOTO-V) (NCT03669042).Хотя это исследование предназначено для оценки результатов у пациентов, перенесших операцию по восстановлению или реконструкции сосудов, оно может дать дополнительную информацию об использовании PhotoFix ^TM в качестве дополнительной терапии к хирургической реваскуляризации инфаркта миокарда после инфаркта миокарда.

CardioCel ^® (Admedus Limited, Австралия) представляет собой биоскашку BP-ECM, сшитую с использованием запатентованной техники фиксации, известной как ADAPT ^® (Pavy et al., 2017). Хотя этот метод использует фиксацию глутарового альдегида, он использует низкую концентрацию глутарового альдегида (0.05%) по сравнению с другими клиническими стандартами, такими как Peri-Guard (0,6%) (Neethling et al., 2018). Кроме того, CardioCel ^® ADAPT ^® включает дополнительный этап детоксикации для удаления любых следов глутаральдегида (Pavy et al., 2017). Недавно в исследовании in vivo для определения кальцификации сравнивали CardioCel ^® с Peri-Guard ^® , PhotoFix ^TM и CorMatrix ^® с использованием модели молодых подкожных крыс. Хотя значительных различий в кальцификации между группами не наблюдалось, уровень экстрагируемого кальция CardioCel ^® был аналогичен таковому у PhotoFix ^TM , 0.45 и 0,44 мкг / мг ткани соответственно, что было ниже, чем у Peri-Guard ^® , 0,85 мкг / мг ткани (Neethling et al., 2018). Были показаны переменные исходы in vivo; CardioCel ^® продемонстрировал многообещающую эндотелизацию и ремоделирование в естественной сердечной среде ECM и устойчивость к кальцификации в модели легочного клапана и реконструкции митрального клапана у хронической ювенильной овцы (Brizard et al., 2014). Однако при использовании в качестве имплантата в восходящей аорте и / или легочной артерии у молодой модели свиньи CardioCel ^® показал плохую интеграцию или ремоделирование в естественной сердечной среде ECM и значительную кальцификацию (Salameh et al., 2018). Аналогичные тенденции наблюдались у педиатрических пациентов, у которых гистопатологический анализ эксплантированного CardioCel ^® выявляет раннюю несостоятельность трансплантата из-за кальцификации и утолщения интимы в областях высокого давления (положение дуги аорты) (Pavy et al., 2017). Примечательно, что CardioCel ^® хорошо переносился в областях с более низким давлением (положение перегородки, клапана и легочной артерии) (Pavy et al., 2017). Учитывая его потенциал, эти результаты ясно указывают на необходимость продолжения исследования оптимальных хирургических показаний CardioCel ^® .

Будущие направления исследования биокаффолдной терапии бесклеточного внеклеточного матрикса в качестве дополнения к АКШ

Как описано выше, механическая среда, в которой используется бесклеточный биоэкафолд ECM, играет роль в определении его оптимального хирургического показания. Идеальные механические свойства, такие как жесткость или эластичность (модуль Юнга), бесклеточного биоэкафолда внеклеточного матрикса для использования в качестве дополнения к АКШ, остаются неизвестными. Например, Peri-Guard ^® (средний модуль Юнга 95.67 МПа) демонстрирует большую жесткость или меньшую эластичность по сравнению с CorMatrix ^® , PhotoFix ^TM и CardioCel ^® (средний модуль Юнга, 36,78, 33,50 и 50,21 МПа, соответственно) (Neethling et al., 2018). Требуются дальнейшие исследования, чтобы понять, является ли более эластичный бесклеточный биопокрытие внеклеточного матрикса, который может лучше соответствовать естественным механическим свойствам сердца, благоприятен для менее эластичного бесклеточного биопокрытия внеклеточного матрикса, который может обеспечить большую структурную поддержку.

Кроме того, необходимо также учитывать влияние бесклеточной терапии биоэкофолком внеклеточного матрикса на электрофизиологию сердца. Хотя конкретные детали выходят за рамки этого обзора, известно, что сердечный фиброз потенцирует сердечную аритмию (Ten Tusscher and Panfilov, 2007; Pellman et al., 2016; Nguyen et al., 2017). За счет уменьшения сердечного фиброза и улучшения микроваскулярной перфузии инфаркта миокарда бесклеточная терапия с использованием биопластов ECM может улучшить электрическую проводимость после инфаркта миокарда.В случае CorMatrix ^® наша группа показала, что его биоиндуктивные свойства ответственны за стимуляцию эндогенных механизмов васкулогенеза и функционального восстановления после инфаркта миокарда (Mewhort et al., 2014, 2016b, 2017). Кроме того, было показано, что усиленный FGF-2 CorMatrix ^® улучшает сократительную способность и демонстрирует положительную электропроводность на модели ИМ у свиней через шестьдесят дней после хирургической имплантации (Tanaka et al., 2015). Ясно, что использование бесклеточной терапии с использованием биоэкафолда внеклеточного матрикса для улучшения электропроводности инфаркта миокарда является важным компонентом в определении ее полезности в качестве дополнения к АКШ.

Помимо обсуждаемых выше, существует множество других бесклеточных биоскаффолдов ECM, используемых или разрабатываемых для использования не только в кардиохирургии, но и во множестве других хирургических приложений (Table 1). В дополнение к источникам свиней и крупного рогатого скота, бесклеточные биокафолды ЕСМ также могут быть получены от лошадей или людей-доноров (Таблица 1). Кроме того, эти биокаффолды могут быть получены из множества других тканевых источников, включая дерму, печень и плаценту (Таблица 1). Возможно, поскольку это высоко регенерирующий орган, бесклеточные биокаффолды ECM, происходящие из печени, могут сохранять природные структурные и физиологические свойства, необходимые для управления про-репаративными механизмами in-situ .В качестве альтернативы, поскольку плацента представляет собой сильно васкуляризованную структуру, может оказаться, что бесклеточный биопластинка внеклеточного матрикса, полученная из плацентарной ткани, содержит необходимые биоиндуктивные сигналы, способствующие неоваскуляризации и интеграции биоскольца в собственно нативное сердечное микроокружение ВКМ. В целом, поскольку состав и структура биопокрытий внеклеточного матрикса являются функцией физиологических потребностей ткани, из которой они получены, будущая работа должна учитывать терапевтический потенциал этих альтернативных тканевых источников при разработке бесклеточных биопокрытий внеклеточного матрикса для использования в кардиохирургии.

В конечном счете, наша исследовательская группа заинтересована в изучении использования бесклеточных биологических каркасов ECM для воздействия и управления локальным сердечным микросредой ECM в месте инфаркта миокарда. Цель состоит в том, чтобы использовать эту инновационную технологию для управления эндогенными механизмами восстановления, такими как ангиогенез или васкулогенез, и ослабить активацию сердечных миофибробластов. Таким образом, можно лучше контролировать дезадаптивное структурное ремоделирование сердца, которое возникает после ишемического повреждения сердца.Имеется пробел в знаниях относительно применения доступных в настоящее время бесклеточных биопластов внеклеточного матрикса в качестве вспомогательного средства во время операции АКШ. Точно так же мало известно о способности этих биоскаффолдов влиять на дисрегулируемое ЕСМ-микроокружение поврежденного миокарда, возможно, посредством сохранения биоактивных свойств и / или механической поддержки. Таким образом, есть возможность охарактеризовать потенциальные терапевтические преимущества бесклеточной репарации инфаркта на основе биосклероза внеклеточного матрикса.

Мы описываем различные клинические исходы доступных в настоящее время бесклеточных биопластов внеклеточного матрикса в различных приложениях кардиохирургии. Мы полагаем, что первоначальные исследования полезности бесклеточных биопокрытий внеклеточного матрикса для восстановления инфаркта должны начаться с тщательного тестирования in vitro . Эти исследования должны быть дополнены хорошо спланированными доклиническими исследованиями, которые могут быть использованы для оценки конкретных показаний к использованию биопластов внеклеточного матрикса. Наконец, существует потребность в более крупномасштабных проспективных клинических испытаниях для оценки возможных терапевтических преимуществ биопокрытий внеклеточного матрикса.

Заключение

Существует уникальная возможность использовать бесклеточные биопластины ECM для восстановления инфаркта. Применяя терапию биопокрытия ECM для модуляции локальной микросреды ECM в месте инфаркта миокарда, мы можем предотвратить неадаптивное структурное ремоделирование сердца, которое часто приводит к необратимой сердечной недостаточности. Дальнейшие исследования должны быть сосредоточены на способности этих биоскаффолдов управлять эндогенными механизмами восстановления и ослаблять сердечный фиброз. Идеальная бесклеточная биопластинка внеклеточного матрикса для восстановления инфаркта сможет вызвать функциональное восстановление поврежденного миокарда.Бесклеточные биопластины внеклеточного матрикса могут иметь значительную клиническую пользу и улучшать прогноз пациентов, страдающих сердечным фиброзом и сердечной недостаточностью.

Авторские взносы

Все авторы разработали, составили и отредактировали рукопись.

Финансирование

Исследовательская группа

PF финансируется Канадским фондом сердца и инсульта.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Изображения сердечных фибробластов человека и сердечных миофибробластов человека были любезно предоставлены доктором Guoqi Teng, научным сотрудником лаборатории трансляции сердца семьи Кэмпбелл, Институт сердечно-сосудистой системы им. Либина в Альберте, Университет Калгари, Калгари, штат Алабама, Канада.

Список литературы

Арора, П. Д., и Маккалок, К. А. Г. (1994). Зависимость ремоделирования коллагена от экспрессии актина гладких мышц фибробластами. J. Cell.Physiol. 159, 161–175. DOI: 10.1002 / jcp.10415

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Arunachalam, S.P., Arani, A., Baffour, F., Rysavy, J.A., Rossman, P.J., Glaser, K.J., et al. (2018). Региональная оценка жесткости миокарда in vivo с использованием трехмерной магнитно-резонансной эластографии на модели инфаркта миокарда у свиньи. Magn. Резон. Med. 79, 361–369. DOI: 10.1002 / mrm.26695

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бадылак, с.Ф. (2002). Внеклеточный матрикс как каркас для реконструкции тканей. Семин. Cell Dev. Биол. 13, 377–383. DOI: 10.1016 / s1084952102000940

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бадилак, С. Ф., Фрейтес, Д. О., Гилберт, Т. В. (2015). Перепечатка: внеклеточный матрикс как биологический материал каркаса: структура и функция. Acta Biomater. 23 (Дополнение), S17 – S26. DOI: 10.1016 / j.actbio.2015.07.016

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бэрд, К.W., Myers, P.O., Piekarski, B., Borisuk, M., Majeed, A., Emani, S.M, et al. (2016). Фотоокисленный перикард крупного рогатого скота в врожденной кардиохирургии: опыт одноцентрового исследования. Взаимодействовать. Кардиоваск. Грудной. Surg. 24: ivw315. DOI: 10.1093 / icvts / ivw315

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бальзам, Л. Б., Вейджерс, А. Дж., Кристенсен, Дж. Л., Кофидис, Т., Вайсман, И. Л., и Роббинс, Р. К. (2004). Гематопоэтические стволовые клетки принимают зрелые гематопоэтические судьбы в ишемизированном миокарде. Природа 428, 668–673. DOI: 10.1038 / nature02460

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Баудино, Т. А., Карвер, В., Джайлс, В., и Борг, Т. К. (2006). Сердечные фибробласты: друг или враг? г. J. Physiol. Circ. Physiol. 291, 2015–2026 гг. DOI: 10.1152 / ajpheart.00023.2006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бельтрами, К. А., Финато, Н., Рокко, М., Феруглио, Г. А., Пуричелли, К., Сигола, Э., и другие. (1994). Структурные основы терминальной недостаточности при ишемической кардиомиопатии у человека. Тираж 89, 151–163. DOI: 10.1161 / 01.cir.89.1.151

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бенджамин, Э. Дж., Блаха, М. Дж., Чиув, С. Е., Кушман, М., Дас, С. Р., Део, Р. и др. (2017). Статистика сердечных заболеваний и инсульта — обновление за 2017 год: отчет Американской кардиологической ассоциации. Тираж 135, e146 – e603. DOI: 10.1161 / CIR.0000000000000485

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бьянко, Р.У., Филлипс Р., Мрачек Дж. И Уитсон Дж. (1996). Оценка осуществимости нового биопротеза перикарда с опосредованной красителем фотоокисленной тканью перикарда крупного рогатого скота. J. Heart Valve Dis. 5, 317–322.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Блом, А.С., Пилла, Дж. Дж., Арклес, Дж., Догерти, Л., Райан, Л. П., Горман, Дж. Х. и др. (2007). Сдерживание желудочков предотвращает расширение инфаркта и улучшает функцию пограничной зоны после инфаркта миокарда: исследование с использованием магнитно-резонансной томографии, трехмерного моделирования поверхности и маркировки миокарда. Ann. Грудной. Surg. 84, 2004–2010. DOI: 10.1016 / j.athoracsur.2007.06.062

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бризард, К. П., Бринк, Дж., Хортон, С. Б., Эдвардс, Г. А., Галати, Дж. К., и Нитлинг, В. М. Л. (2014). Новая инженерная обработка перикарда крупного рогатого скота обеспечивает исключительную устойчивость к кальцификации при митральной и легочной имплантации на модели молодых овец. J. Thorac. Кардиоваск. Surg. 148, 3194–3201. DOI: 10.1016 / J.JTCVS.2014.08.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Браун Р. Д., Эмблер С. К., Митчелл М. Д. и Лонг К. С. (2005). СЕРДЕЧНЫЙ ФИБРОБЛАСТ: терапевтическая мишень при ремоделировании и недостаточности миокарда. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 45, 657–687. DOI: 10.1146 / annurev.pharmtox.45.120403.095802

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Камеллити П., Девлин Г. П., Мэтьюз К. Г., Коль П. и Грин К.Р. (2004). Различная в пространстве и времени экспрессия коннексинов фибробластов после инфаркта желудочков овцы. Cardiovasc. Res. 62, 415–425. DOI: 10.1016 / j.cardiores.2004.01.027

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Добачевски, М., Буяк, М., Ли, Н., Гонсалес-Кесада, К., Мендоса, Л. Х., Ван, X.-F., et al. (2010a). Передача сигналов Smad3 критически регулирует фенотип и функцию фибробластов при заживлении инфаркта миокарда. Circ.Res. 107, 418–428. DOI: 10.1161 / CIRCRESAHA.109.216101

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Добачевски М., Гонсалес-Кесада К. и Франгогианнис Н. Г. (2010b). Внеклеточный матрикс как модулятор воспалительного и репаративного ответа после инфаркта миокарда. J. Mol. Клетка. Кардиол. 48, 504–511. DOI: 10.1016 / j.yjmcc.2009.07.015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вентилятор, Д., Такавале, А., Ли, Дж., И Кассири, З. (2012). Кардиальные фибробласты, фиброз и ремоделирование внеклеточного матрикса при сердечных заболеваниях. Восстановление тканей фиброгенеза 5:15. DOI: 10.1186 / 1755-1536-5-15

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Fedak, P. W. M., Verma, S., Weisel, R. D., and Li, R.-K. (2005a). Ремоделирование и отказ сердца: от молекул к человеку (Часть I). Cardiovasc. Патол. 14, 1–11. DOI: 10.1016 / j.carpath.2004.12.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Голомб, Г., Шен, Ф. Дж., Смит, М. С., Линден, Дж., Диксон, М., и Леви, Р. Дж. (1987). Роль индуцированных глутаральдегидом поперечных связей в кальцификации перикарда крупного рогатого скота, используемого в биопротезах сердечного клапана. г. J. Pathol. 127, 122–130.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Gyöngyösi, M., Wojakowski, W., Lemarchand, P., Lunde, K., Tendera, M., Bartunek, J., et al. (2015). Метаанализ клеточных кардиологических исследований (ACCRUE) у пациентов с острым инфарктом миокарда на основе индивидуальных данных пациентов. Circ. Res. 116, 1346–1360. DOI: 10.1161 / CIRCRESAHA.116.304346

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Heymans, S., Schroen, B., Vermeersch, P., Milting, H., Gao, F., Kassner, A., et al. (2005). Повышенная кардиальная экспрессия тканевого ингибитора металлопротеиназы-1 и тканевого ингибитора металлопротеиназы-2 связана с сердечным фиброзом и дисфункцией в сердце человека, хронически перегруженном давлением. Тираж 112, 1136–1144.DOI: 10.1161 / CIRCULATIONAHA.104.516963

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Hinz, B., Celetta, G., Tomasek, J. J., Gabbiani, G., and Chaponnier, C. (2001). Экспрессия альфа-актина гладких мышц активирует сократительную активность фибробластов. Мол. Биол. Cell 12, 2730–2741. DOI: 10.1091 / mbc.12.9.2730

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джексон, Б. М., Горман, Дж. Х., Моэни, С. Л., Гай, Т. С., Нарула, Н., Нарула Дж. И др. (2002). Расширение пограничной зоны миокарда при постинфарктной дилатационной кардиомиопатии. J. Am. Coll. Кардиол. 40, 1160–1167. DOI: 10.1016 / S0735-1097 (02) 02121-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кавагути М., Такахаши М., Хата Т., Кашима Ю., Усуи Ф., Моримото Х. и др. (2011). Активация инфламмасом сердечных фибробластов важна для ишемии / реперфузионного повреждения миокарда. Тираж 123, 594–604.DOI: 10.1161 / CIRCULATIONAHA.110.982777

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, А. А., Делхаас, Т., Мак-Каллох, А. Д., и Вильярреал, Ф. Дж. (1999). Дифференциальные ответы взрослых сердечных фибробластов на биаксиальные деформации in vitro. J. Mol. Клетка. Кардиол. 31, 1833–1843. DOI: 10.1006 / JMCC.1999.1017

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лесли, К. О., Таатес, Д. Дж., Шварц, Дж., Вонтуркович, М.и Лоут, Р. Б. (1991). Сердечные миофибробласты экспрессируют альфа-актин гладких мышц во время перегрузки правого желудочка у кролика. г. J. Pathol. 139, 207–216.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Махони В. М., Меццано В., Мирамс Г. Р., Маасс К., Ли З., Серроне М. и др. (2016). Коннексин 43 способствует электротонической проводимости через рубцовую ткань в неповрежденном сердце. Sci. Отчет 6: 26744. DOI: 10.1038 / srep26744

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маруи, А., Кимура, Т., Нишиваки, Н., Комия, Т., Ханью, М., Шиоми, Х. и др. (2014). Трехлетние результаты после чрескожного коронарного вмешательства и аортокоронарного шунтирования у пациентов с сердечной недостаточностью: из когорты 2 из регистра чрескожных коронарных вмешательств / коронарного шунтирования CREDO-Kyoto. ЧКВ / CAB CREDO-Kyoto. Eur. J. Cardiothorac. Surg. 47, 316–321. DOI: 10.1093 / ejcts / ezu131

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Макдональд, М.А., Эшли, Э. А., Федак, П. В. М., Хокинс, Н., Януцци, Дж. Л., Мак-Мюррей, Дж. Дж. В. и др. (2017). Помните о пробеле: текущие проблемы и будущее лечение сердечной недостаточности. Банка. J. Cardiol. 33, 1434–1449. DOI: 10.1016 / j.cjca.2017.08.023

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Mewhort, H. E. M., Lipon, B. D., Svystonyuk, D. A., Teng, G., Guzzardi, D. G., Silva, C., et al. (2016a). Моноциты усиливают опосредованное сердечными миофибробластами ремоделирование внеклеточного матрикса человека посредством TGF-β 1. г. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 310, H716 – H724. DOI: 10.1152 / ajpheart.00309.2015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Mewhort, H. E. M., Turnbull, J. D., Satriano, A., Chow, K., Flewitt, J. A., Andrei, A. C., et al. (2016b). Восстановление эпикардиального инфаркта с помощью биоиндуктивного внеклеточного матрикса способствует васкулогенезу и восстановлению миокарда. J. Пересадка сердца и легких. 35, 661–670. DOI: 10.1016 / j.healun.2016.01.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мьюхорт, Х.Э. М., Свистонюк, Д. А., Тернбулл, Дж. Д., Тенг, Г., Белке, Д. Д., Гуцзарди, Д. Г. и др. (2017). Биоактивный каркас внеклеточного матрикса способствует адаптивному ремоделированию и восстановлению сердца. JACC Basic Пер. Sci. 2, 450–464. DOI: 10.1016 / j.jacbts.2017.05.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мьюхорт, Х. Э. М., Тернбулл, Дж. Д., Мейндерт, Х. К., Нгу, Дж. М. С. и Федак, П. В. М. (2014). Восстановление эпикардиального инфаркта с использованием биоматериала CorMatrix-ECM, усиленного основным фактором роста фибробластов, ослабляет постишемическое ремоделирование сердца. J. Thorac. Кардиоваск. Surg. 147, 1650–1659. DOI: 10.1016 / J.JTCVS.2013.08.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мур, М.А., и Филлипс, Р.Э. (1997). Биосовместимость и иммунологические свойства ткани перикарда, стабилизированные опосредованным красителем фотоокислением. J. Heart Valve Dis. 6, 307–315.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Мур, М.А., Филлипс, Р.Э., Макилрой, Б.К., Уолли, В.М., и Хендри, П.Дж. (1998). Оценка свиных клапанов, полученных путем опосредованного красителем фотоокисления. Ann. Грудной. Surg. 66, S245 – S248. DOI: 10.1016 / S0003-4975 (98) 01118-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мосала Нежад, З., Понселе, А., де Керхов, Л., Джанелло, П., Фервай, К., и Эль-Хури, Г. (2016). Внеклеточный матрикс подслизистой оболочки тонкого кишечника (CorMatrix ^® ) в сердечно-сосудистой хирургии: систематический обзор. Взаимодействовать. Кардиоваск.Грудной. Surg. 22, 839–850. DOI: 10.1093 / icvts / ivw020

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мерри К. Э., Сунпаа М. Х., Райнеке Х., Накадзима Х., Накадзима Х. О., Рубарт М. и др. (2004). Гематопоэтические стволовые клетки не трансдифференцируются в сердечные миоциты при инфаркте миокарда. Природа 428, 664–668. DOI: 10.1038 / nature02446

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Neethling, W.М. Л., Пульс, К., Ри, А. (2018). Сравнение физических и биологических свойств CardioCel ^® с широко используемыми биокаффолдами. Взаимодействовать. Кардиоваск. Грудной. Surg. 26, 985–992. DOI: 10.1093 / icvts / ivx413

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Падалино, М.А., Куарти, А., Анджели, Э., Фриго, А.С., Вида, В.Л., Поцци, М. и др. (2015). Ранний и среднесрочный клинический опыт применения каркаса внеклеточного матрикса для реконструктивной хирургии сердца и сосудов: многоцентровое итальянское исследование. Взаимодействовать. Кардиоваск. Грудной. Surg. 21, 40–49. DOI: 10.1093 / icvts / ivv076

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Park, D., Mewhort, H., Teng, G., Belke, D., Turnbull, J., Svystonyuk, D., et al. (2017). Увеличение гепарина усиливает биоактивные свойства каркаса бесклеточного внеклеточного матрикса. Tissue Eng. Часть A 24, 128–134. DOI: 10.1089 / ten.TEA.2017.0004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Парк, Т.-H., Nagueh, S. F., Khoury, D. S., Kopelen, H.A., Akrivakis, S., Nasser, K., et al. (2006). Влияние структуры и функции миокарда после инфаркта на измерения диастолической деформации: значение для оценки жизнеспособности миокарда. г. J. Physiol. Circ. Physiol. 290, H724 – H731. DOI: 10.1152 / ajpheart.00714.2005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Патель, М. Р., Калхун, Дж. Х., Демер, Дж. Дж., Грантам, Дж. А., Мэддокс, Т. М., Марон, Д.J., et al. (2017). ACC / AATS / AHA / ASE / ASNC / SCAI / SCCT / STS 2017 соответствующие критерии использования коронарной реваскуляризации у пациентов со стабильной ишемической болезнью сердца. J. Am. Coll. Кардиол. 69, 2212–2241. DOI: 10.1016 / j.jacc.2017.02.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пави, К., Михиелон, Г., Робертус, Дж. Л., Лакур-Гайе, Ф., и Гез, О. (2017). Первые 2-летние результаты имплантации пластыря CardioCel ^® детям. Взаимодействовать.Кардиоваск. Грудной. Surg. 26, 448–453. DOI: 10.1093 / icvts / ivx295

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пеллман Дж., Чжан Дж. И Шейх Ф. (2016). Связь миоцитов и фибробластов при сердечном фиброзе и аритмиях: механизмы и модельные системы. J. Mol. Клетка. Кардиол. 94, 22–31. DOI: 10.1016 / j.yjmcc.2016.03.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рирдон, С. (2018). Правительство США прекращает исследования стволовых клеток сердца. Природа. DOI: 10.1038 / d41586-018-07232-0

CrossRef Полный текст

Rosario-Quinones, F., Magid, M. S., Yau, J., Pawale, A., and Nguyen, K. (2015). Тканевая реакция на имплантаты подслизистой оболочки кишечника свиней (CorMatrix) у педиатрических кардиологических пациентов: опыт одного центра. Ann. Грудной. Surg. 99, 1373–1377. DOI: 10.1016 / J.ATHORACSUR.2014.11.064

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Саламе, А., Грейманн, В., Вондрис, Д., Костелка, М. (2018). Кальцификация или нет. Вот в чем вопрос. Годовое исследование сосудистых бляшек перикарда крупного рогатого скота (CardioCel) у мини-свиней. Семин. Грудной. Кардиоваск. Surg. 30, 54–59. DOI: 10.1053 / J.SEMTCVS.2017.09.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Саксена А., Франгогианнис Н. Г. (2015). «Активация фибробластов в инфарктном миокарде» в Фиброз сердца и сердечная недостаточность: причина или следствие? , ред I.Диксон и Дж. Т. Вигл (Cham: Springer International Publishing), 5–22. DOI: 10.1007 / 978-3-319-17437-2_2

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шмидт, К. Э., и Байер, Дж. М. (2000). Бесклеточные сосудистые ткани: природные биоматериалы для восстановления тканей и тканевой инженерии. Биоматериалы 21, 2215–2231. DOI: 10.1016 / S0142-9612 (00) 00148-4

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Серини, Г., Бочатон-Пиаллат, М.-Л., Ропраз, П., Гейноз, А., Борси, Л., Зарди, Л. и др. (1998). Фибронектиновый домен ED-A имеет решающее значение для индукции миофибробластного фенотипа путем трансформации фактора роста-β1. J. Cell Biol. 142, 873–881. DOI: 10.1083 / JCB.142.3.873

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шимкунас, Р., Ван, Г.-Й., Чжан, З., Гуччионе, Дж. М., Рэтклифф, М. Б., и Бейкер, А. Дж. (2011). Дисфункция миофиламентов способствует нарушению сокращения миокарда в пограничной зоне инфаркта. г. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 307, h2150 – h2158. DOI: 10.1016 / j.bpj.2010.12.1823

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шимкунас Р., Чжан З., Венк Дж. Ф., Сулеймани М., Хазалпур М., Асеведо-Болтон Г. и др. (2013). Сократимость миокарда левого желудочка снижается в пограничной зоне после заднебокового инфаркта миокарда. Ann. Грудной. Surg. 95, 1619–1625. DOI: 10.1016 / j.athoracsur.2013.02.005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шинде, А.В., Франгогианнис Н. Г. (2014). Фибробласты при инфаркте миокарда: роль в воспалении и восстановлении. J. Mol. Клетка. Кардиол. 70, 74–82. DOI: 10.1016 / j.yjmcc.2013.11.015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Саттон, М., и Шарп, Н. (2000). Ремоделирование левого желудочка после инфаркта миокарда: патофизиология и терапия. Тираж 101, 2981–2988. DOI: 10.1161 / 01.cir.101.25.2981

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Свистонюк, Д.А., Мьюхорт, Х. Э. М., и Федак, П. В. М. (2018). Использование бесклеточных биоактивных каркасов внеклеточного матрикса для улучшения эндогенного восстановления сердца. Фронт. Кардиоваск. Med. 5:35. DOI: 10.3389 / fcvm.2018.00035

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Свистонюк, Д. А., Нгу, Дж. М., Мевхорт, Х. Э., Липон, Б. Д., Тенг, Г., Гуззарди, Д. Г. и др. (2015). Фактор роста фибробластов-2 регулирует ремоделирование внеклеточного матрикса, опосредованное сердечными миофибробластами человека. J. Transl. Med. 13: 147. DOI: 10.1186 / s12967-015-0510-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Танака А., Кавадзи К., Патель А. Р., Табата Ю., Берк М. К., Гупта М. П. и др. (2015). Конструктивное ремоделирование миокарда in situ пластыря внеклеточного матрикса усилено контролируемым высвобождением фактора роста. J. Thorac. Кардиоваск. Surg. 150, 1280–1290.e2. DOI: 10.1016 / j.jtcvs.2015.07.073

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тен Тушер, К.Х., Панфилов А.В. (2007). Влияние диффузного фиброза на распространение волн в желудочковой ткани человека. Europace 9, vi38 – vi45. DOI: 10.1093 / europace / eum206

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Teng, G., Svystonyuk, D., Mewhort, H. E. M., Turnbull, J. D., Belke, D. D., Duff, H. J., et al. (2015). Тетрандрин обращает вспять активацию сердечных миофибробластов человека и фиброз миокарда. г. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 308, h2564 – h2574.DOI: 10.1152 / ajpheart.00126.2015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Томасек, Дж. Дж., Габбиани, Г., Хинц, Б., Шапонье, К., и Браун, Р. А. (2002). Миофибробласты и механорегуляция ремоделирования соединительной ткани. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 3, 349–363. DOI: 10.1038 / nrm809

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Торрес, В. М., Джейкобс, Дж., Довяк, Х., Барлоу, С. К., Зиле, М. Р., Шазли, Т., и другие. (2018). Региональные и временные изменения деформации и жесткости левого желудочка на модели инфаркта миокарда у свиней. г. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 315, 958–967. DOI: 10.1152 / ajpheart.00279.2018.-

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

ван Стинберге, М., Шуберт, Т., Гио, Ю., Бузен, К., Боллен, X., и Джанелло, П. (2017). Повышенная сосудистая биосовместимость децеллюляризованных ксено- / аллогенных матриц в модели грызунов. Банк клеточных тканей. 18, 249–262. DOI: 10.1007 / s10561-017-9610-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Воан, М. Б., Ховард, Э. У., и Томасек, Дж. Дж. (2000). Трансформирующий фактор роста бета1 способствует морфологической и функциональной дифференциации миофибробластов. Exp. Cell Res. 257, 180–189. DOI: 10.1006 / excr.2000.4869

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Велагалети, Р.С., Пенцина, М. Дж., Мурабито, Дж. М., Ван, Т. Дж., Парих, Н. И., Д’Агостино, Р. Б. и др. (2008). Долгосрочные тенденции частоты сердечной недостаточности после инфаркта миокарда. Тираж 118, 2057–2062. DOI: 10.1161 / CIRCULATIONAHA.108.784215

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст

Заиди, А. Х., Натан, М., Эмани, С., Бэрд, К., дель Нидо, П. Дж., Говро, К., и др. (2014). Предварительный опыт использования подслизистой оболочки кишечника свиней (CorMatrix) для реконструкции клапана при врожденных пороках сердца: гистологическая оценка эксплантированных клапанов. J. Thorac. Кардиоваск. Surg. 148, 2216–2225.e1. DOI: 10.1016 / J.JTCVS.2014.02.081

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhao, L., и Eghbali-Webb, M. (2001). Высвобождение про- и антиангиогенных факторов сердечными фибробластами человека: влияние на синтез ДНК и защиту в условиях гипоксии в эндотелиальных клетках человека. Biochim. Биофиз. Acta 1538, 273–282. DOI: 10.1016 / s0167-4889 (01) 00078-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чжао, X.-H., Laschinger, C., Arora, P., Szászi, K., Kapus, A., and McCulloch, C.A. (2007). Force активирует активность промотора альфа-актина гладких мышц через сигнальный путь Rho. J. Cell Sci. 120, 1801–1809. DOI: 10.1242 / jcs.001586

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Биохимия, Университет Торонто — Андраш Капус

Профессор

MD , Университет Земмельвейса, Будапешт, Венгрия, 1986
Доктор философии , Университет Земмельвейса, Будапешт, Венгрия, 1992
Postdoc , Отдел клеточной биологии, Госпиталь для больных детей, Торонто, Канада, 1992- 1995

Я родился (мульти) клеточным физиологом в Будапеште, Венгрия, получил степень доктора медицины в Университете Земмельвейса в 1986 году.Я был очарован исследованиями, будучи студентом второго курса медицинского факультета кафедры физиологии, и остался здесь после окончания учебы, чтобы получить докторскую степень в 1992 году под руководством докторов наук. Фоньо и Г.Л. Лукач из (патофизиологии) митохондриального транспорта катионов. Мои основные достижения в том, что этот период включал характеристику митохондриального обменника Na + / H + (NHE) и унипортера Ca2 +, первое непрерывное измерение внутримитохондриального pH и Ca2 +, а также определение физиологической роли последнего (с G.L Lukacs) как ключевой регулятор цикла лимонной кислоты. Я продолжил функциональную характеристику нового H + -канала в фагоцитах, тема, которая побудила меня провести постдокторскую работу (1992-95) под наблюдением доктора С. Гринштейна из отделения клеточной биологии больницы для больных детей в Торонто. Я провел анализ патч-клампа нового H + канала и идентифицировал функциональные различия изоформ NHE плазматической мембраны. Здесь я также заразился своим пожизненным интересом — вопросом о том, как биофизические параметры, такие как объем клетки, напряжение / сократимость и поверхностный заряд, преобразуются в биохимические сигналы и влияют на судьбу и пластичность клеток.В частности, я стремился понять, как организация цитоскелета регулирует транспорт и транскрипцию генов. Я переехал в Канаду в 1997 году и стал ИП в Институте общих исследований Торонто (1997-2003) и в больнице Св. Майклса / Исследовательском центре Кинан (KRC) (с 2003 года по настоящее время), а также был назначен в отделение хирургии (1999). ) и биохимии (2013). Мы исследовали организацию и роль цитоскелета в контексте стресса и эпителиального мезенхимального перехода (EMT), ключевого процесса при фиброзе органов и раке.В настоящее время мы стремимся понять, как цитоскелет регулирует нуклеоцитопальмический трафик факторов транскрипции и, следовательно, фенотип, пластичность, особенно во время фиброза органов и генерации миофиброблатов. Наши основные результаты включают описание зависимой от объема клетки регуляции Rho GTPases и нового каскада киназ, идентификацию регуляторной роли клеточных контактов в EMT, описание модели двух ударов (контактное повреждение и фиброгенный цитокин TGFβ). перехода EMT / эпителиально-миофибробласты, концепции сайт-специфической чувствительности к TGFβ и приобретенной цилиопатии во время фиброгенеза.Я опубликовал 127 рецензируемых статей (> 7500 цитирований), являюсь руководителем исследовательского учебного центра и платформы интенсивной терапии / воспаления в KRC и заместителем заместителя председателя по исследованиям в отделении хирургии.

Исследовательская лаборатория

Члены лаборатории

Янне Фольке Бялик, аспирант

Майкл Кофлер, докторант

Мария Зена Миранда, магистр

Мэтью Розицки, аспирант

Пэм Спейт, научный сотрудник

Наша лаборатория — это оживленный и дружелюбный остров в открытом океане исследовательского пространства, которое разделяют 10 ИП на 6-м этаже недавно построенного Центра биомедицинских исследований Кинана, связанного с центром Св.Больница Михаила.

В дополнение к доступу к ультрасовременному базовому оборудованию (гистология, биовизуализация, проточная цитометрия, микродиссекция с лазерным захватом, культура тканей, виварий) наша лаборатория оснащена системой конфокальной микроскопии с вращающимся диском Hamamatsu / Leica, дополненной камерой для окружающей среды. и связан с аппаратом iLAS FRAP, системой флуореметрии PTI, лиминометром Lumat-Berthold и аппаратом для ПЦР iQ5. Мы находимся в процессе покупки системы флуоресцентного микроскопа VivaVieW в инкубаторе для долговременной визуализации в реальном времени.

Подробнее: Kapus Lab

Описание исследования

Основная задача моей лаборатории — понять клеточные и молекулярные механизмы, лежащие в основе клеточной пластичности, особенно в том, что касается эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП) и образования миофибробластов. Эти процессы играют решающую роль в заживлении и регенерации ран и являются центральными в патобиологии фиброза органов, то есть прогрессирующего и часто фатального рубцевания легких, печени и почек, вызванного травмой.Клеточная пластичность, т.е. преобразование одного клеточного фенотипа в другой, регулируется химическими стимулами, такими как факторы роста (например, TGFβ) и цитокины, а также механическими факторами, такими как сократимость клеток, силы, действующие на межклеточные контакты или жесткость ядра и ткани. . Мы стремимся понять взаимодействие и синергию между химической и механической передачей сигналов в определении судьбы клетки. Цитоскелет играет центральную роль в интеграции различных фиброгенных входов.Соответственно, мы изучаем, как цитоскелет перестраивается под воздействием условий химического и механического стресса (например, осмотического стресса), и, наоборот, как ремоделирование цитоскелета контролирует основные функции клетки, включая экспрессию генов, перенос ионов, подвижность и динамику клеточных органелл, таких как митохондрии, ядра и первичная ресничка. Одна из центральных проблем в этой области — раскрыть механизмы, посредством которых ремоделирование цитоскелета регулирует ядерно-цитоплазматический трафик факторов транскрипции (например,грамм. Rho GTPase нацелена на связанный с миокардином фактор транскрипции (MRTF) или эффекторы пути Hippo TAZ и YAP), которые, в свою очередь, репрограммируют экспрессию генов, поскольку имеют определяющие судьбу эффекты на фенотип. В целом наше исследование касается фундаментальной биологии и клеточной патологии повреждения и восстановления.

Биология эпителиально-мезенхимального перехода (EMT) и перехода фибробласт-миофибробласт

Наша цель — понять, как нормальные эпителиальные клетки (особенно почек) превращаются в матрикс-продуцирующие (формирующие рубцы) инвазивные и сократительные миофибробласты.Мы исследуем клеточные и молекулярные механизмы, посредством которых повреждение межклеточных контактов приводит к EMT и взаимодействует с определяющими судьбу путями, такими как передача сигналов TGFbeta и механизм передачи сигналов Hippo. Это исследование позволяет понять фундаментальные механизмы, ответственные за патогенез основных заболеваний, таких как фиброз почек и легких, цирроз печени и злокачественная трансформация.

Роль цитоскелтона в регуляции окислительного стресса

Полимеризация актина влияет на генерацию активных форм кислорода (ROS), но лежащие в основе механизмы плохо изучены.Это направление исследований направлено на изучение того, как изменения в динамике актина, инициируя транскрипционные ответы или структурное ремоделирование, изменяют экспрессию и функцию систем, генерирующих АФК.

Влияние организации цитокелктона на ремоделирование органелл: эффекты на первичные реснички и митохоиндрии

EMT, преимущественно через актомиозин-зависимые процессы, ассоциируется с драматическими изменениями в первичных ресничках, ключевой механохимической антенне клетки.Проект направлен на характеристику этих эффектов, лежащих в их основе молекулярных механизмов и вытекающих из них функциональных последствий.

Механический (осмотический) стресс вызывает серьезные структурные изменения (фрагментацию) в митохондриях. Мы исследуем роль цитоскелета в этих изменениях, лежащих в основе молекулярных механизмов и вытекающих из них функциональных последствий.

Роль цитоскелета в регуляции ядерно-цитоплазматического движения факторов транскрипции

Механочувствительные факторы транскрипции, такие как MRTF и TAZ, подвергаются ядерно-цитоплазматическому перемещению в соответствии с регулируемым актиновым скелетом способом.Эти проекты направлены на выявление различных механизмов, посредством которых цитоскелет и сократимость клеток изменяют перемещение факторов транскрипции (удерживание цитозола, захват ядра, отток, захват). Эти процессы играют центральную роль в механотрансдукции, регуляции пластичности клеток, фиброгенеза и пролиферации.

Публикации

Посмотреть все публикации на PubMed

Сжатие клеток регулирует киназы Src и индуцирует фосфорилирование тирозина кортактина, независимо от осмотической регуляции обменников Na + / H +.
Kapus A, Szászi K, Sun J, Rizoli S, Rotstein OD
J Biol Chem. 1999 Mar 19; 274 (12): 8093-102 Читать

Осмотическое стресс-индуцированное ремоделирование кортикального цитоскелета
Di Ciano C, Nie Z, Szászi K, Lewis A, Uruno T, Zhan X, Rotstein OD, Mak A, Kapus A
Am J Physiol Cell Physiol. 2002 сентябрь; 283 (3): C850-65. Прочтите

Центральная роль Rho в индуцированной TGF-beta1 экспрессии альфа-гладкомышечного актина во время эпителиально-мезенхимального перехода
Masszi A, Di Ciano C, Sirokmány G, Arthur WT, Rotstein OD, Wang J, McCulloch CA, Rosivall L, Mucsi I, Kapus A.
Am J Physiol Renal Physiol. 2003 Май; 284 (5): F911-24. Читать

Целостность межклеточных контактов является критическим регулятором индуцированного TGF-бета 1 перехода эпителия в миофибробласт: роль бета-катенина
Masszi A, Fan L, Rosivall L, McCulloch CA, Rotstein OD, Mucsi I, Kapus A
Am J Pathol. 2004 Dec; 165 (6): 1955-67 Read

Активация рецептора изменяет потенциал внутренней поверхности во время фагоцитоза
Йунг Т., Теребизник М., Ю. Л., Сильвиус Дж., Абиди В. М., Филипс М., Левин Т., Капус А., Гринштейн С.
Наука. 2006 Jul 21; 313 (5785): 347-51 Read

Зависимая от клеточного контакта регуляция перехода эпителиально-миофибробласты через путь ро-ро-киназа-фосфомиозин
Fan L, Sebe A, Péterfi Z, Masszi A , Thirone AC, Rotstein OD, Nakano H, McCulloch CA, Szászi K, Mucsi I, Kapus A
Mol Biol Cell. 2007 Mar; 18 (3): 1083-97 Read

Мембранный фосфатидилсерин регулирует поверхностный заряд и локализацию белка
Yeung T, Gilbert GE, Shi J, Silvius J, Kapus A, Grinstein S
Science.2008 Jan 11; 319 (5860): 210-3 Read

Судебно-определяющие механизмы эпителиально-миофибробластного перехода: основная тормозящая роль Smad3
Masszi A, Speight P, Charbonney E, Lodyga M, Nakano H, Szászi K , Kapus A
J Cell Biol. 2010 Feb 8; 188 (3): 383-99 Read

β-катенин и Smad3 регулируют активность и стабильность миокардин-связанного транскрипционного фактора во время эпителиально-миофибробластного перехода
Charbonney E, Speight P, Masszi A, Nakano H , Kapus A
Mol Biol Cell.2011 Dec; 22 (23): 4472-85 Читать

Дифференциальная местная восприимчивость к TGFβ в интактных и поврежденных областях эпителия: ключевая роль в переходе миофибробластов
Speight P, Nakano H, Kelley TJ, Hinz B and Kapus Клетка Mol Biol
. 2013 ноя; 24 (21): 3326-36 Читать

Судьба первичной реснички во время перехода миофибробластов
Rozycki M, Lodyga M, Lam J, Fatyol K, Speight P и Kapus A
Mol Biol Cell. 2014 Март; 25 (5): 643-57 Читать

Механика матрицы и взаимодействия рецептор-лиганд в клеточной адгезии

Клеточные адгезии как к растворимым, так и к нерастворимым лигандам внеклеточного матрикса имеют решающее значение для межклеточной и внутриклеточной передачи сигналов, которая опосредует многочисленные физиологические процессы.Эти адгезии представляют собой сложные структуры, состоящие из множества каркасных и сигнальных белков. Существует четыре различных типа адгезий клетка-матрица: фокальные комплексы, фокальные адгезии, фибриллярные адгезии и трехмерные адгезии клетка-матрикс, которые различаются по составу, организации и функции. Первичные медиаторы клеточно-матричных адгезий представляют собой интегрины, которые представляют собой механочувствительные трансмембранные рецепторные протеины, которые непосредственно связываются с лигандами матрикса, чтобы инициировать образование адгезии. На развитие адгезии клетка-матрица влияет ряд факторов, включая свойства матрикса, такие как размерность и жесткость, а также силы, генерируемые как внутри, так и извне, действующие на участки адгезии.В этой статье мы обсуждаем, как матричная механика и силы влияют на сборку и созревание клеточно-матричных адгезий.

У вас есть доступ к этой статье

Подождите, пока мы загрузим ваш контент…

Что-то пошло не так. Попробуйте снова?

Механическая сила регулирует организацию внеклеточного матрикса сухожилия и морфогенез теноцитов посредством передачи сигналов TGFbeta

Существенных изменений:

1) Введение не совсем точно описывает состояние поля.Например, авторы заявляют: «Несмотря на недавнее понимание природы таких реакций, мало исследований изучали, как клетки адаптируются к силе и изменяют ландшафт ECM, чтобы усилить или ослабить его соответственно». Синтез коллагена в сухожилиях был связан с механической нагрузкой, а снижение активности коллагена было обнаружено с начала 2000-х годов. (Одним из примеров является «Роль внеклеточного матрикса в адаптации сухожилий и скелетных мышц к механической нагрузке», 2004 г.). Было бы полезно изменить текст, чтобы подчеркнуть, что известно довольно много о том, как клетки в культуре реагируют на силу и соответственно изменяют матрицу, но меньше известно о in vivo (с соответствующими ссылками).

1a) Мы изменили текст, чтобы прояснить эти моменты и включить дополнительные ссылки. Однако, в то время как исследования коллагеновых гелей in vitro показали, что сила необходима для обновления ВКМ сухожилий, парадигмы упражнений дали неоднозначные результаты по влиянию силы на ВКМ сухожилий. В целом, систематический анализ роли силы в развитии сухожилий in vivo отсутствует, особенно ее влияния на дифференцировку теноцитов.

1b) Введение, первый абзац: мы добавили ссылки, которые надлежащим образом показывают роль силы в организации ECM (Maeda et al., 2011; Ng et al., 2014).

1c) Введение, первый абзац: Мы также добавили слово «in vivo», чтобы подчеркнуть тот факт, что существует очень мало исследований in vivo, которые изучали роль силы в организации ECM и клеточном морфогенезе.

2) Рукопись, кажется, написана для читателя, который хорошо знаком с системой рыбок данио. Воздействие рукописи было бы намного выше, если бы авторы сделали ее более доступной для более широкого круга читателей (объясняя разницу между тем, что они называют эмбриональным и личиночным развитием, что такое горизонтальная и вертикальная миосепта, что такое полусегмент и т. Д. .). Кроме того, хотя среди исследователей рыбок данио существуют разногласия, в какой момент границы сомитов следует называть вертикальными миосептами по сравнению с мышечно-сухожильными соединениями, также потенциально верно, что воздействие за пределами поля было бы выше, если бы авторы решили назвать их MTJ.

2a) Мы объяснили специфические временные точки развития рыбок данио и анатомические термины.

2b) Подраздел «Теноциты удлиняются с началом сокращения мышц», первый абзац: объясняет разницу между эмбриональными и личиночными временными точками.

2c) Подраздел «Теноциты удлиняются с началом сокращения мышц», первый абзац: Объясняет термины VMS и HMS.

2d) Подраздел «Теноциты удлиняются с началом сокращения мышц», первый абзац: мы удалили термин «полусегмент», чтобы избежать путаницы, и использовали термин MTJ для обозначения участков прикрепления мышц.

3) Авторы видят уменьшение длины выступов с 70 мкм до 50 мкм. Они подразумевают, что это является причиной механического зондирования и экспрессии генов теноцитами.Однако подтверждений этому нет. Им следует немного смягчить это утверждение. Им также следует пояснить, почему они считают, что сокращение примерно на 20% имеет значение для MTJ.

3a) Мы обнаружили сильную корреляцию между вызванными силой изменениями как длины проекции, так и ветвления с экспрессией ассоциированных генов, включая белки ECM, которые, как мы знаем, жизненно важны для целостности MTJ. Однако экспериментально доказать, что это причинно, чрезвычайно сложно, и мы соответственно смягчили наши аргументы.Уменьшение длины означает, что выступы воспринимают изменения силы и реагируют, проникая и проходя через ECM. Хотя роль таких выступов в теноцитах не совсем понятна, аналогичные реакции на силу были показаны для остеоцитов, как мы уже упоминали в тексте. На дополнительных этапах включаем данные о длине, количестве и ветвлении выступов. Хотя 20% могут показаться незначительными, это в сочетании с уменьшенным разветвлением приводит к гораздо меньшему количеству прогнозов на единицу площади, которые мы количественно определили и добавили к результатам.

3b) Подраздел «Удлинение теноцитов требует сокращения мышц»: Мы провели дальнейший анализ, чтобы показать, что помимо длины выступов и сложности ветвления, также существенно влияет плотность выступов вдоль VMS. Мы включили данные, как на Рисунке 2 — приложение к рисунку 1.

3c) Подраздел «Для удлинения теноцитов требуется сокращение мышц»: мы также подчеркиваем, что наши результаты показывают сильную корреляцию только между механической силой и морфогенезом теноцитов.

4) Лечение нокодазолом является очень жестким способом оценки роли микротрубочек в формировании выступов теноцитов и механическом напряжении. Обработка Noco в течение 12 часов, скорее всего, заблокирует многие биологические процессы, помимо образования выступов теноцитов, и некоторые из этих процессов могут косвенно влиять на теноциты. Производилась ли эта блокировка за 12 часов непосредственно перед исправлением? Почему выбирали так долго? Влияет ли более короткое лечение на прогнозы? Есть ли стратегия, которую авторы могли бы использовать для специфического блокирования функции микротрубочек в теноцитах? Если нет, они, безусловно, должны заявить о предостережениях в отношении лечения нокодазолом целого эмбриона и соответствующим образом изменить свои интерпретации, особенно в отношении их заявления о том, что микротрубочки необходимы для формирования проекций теноцитов и экспрессии гена теноцитов.

4a) Мы проводили более короткие курсы лечения нокодазолом [наши первоначальные эксперименты были основаны на опубликованных исследованиях, в которых лечение длилось до 6 часов (Mendieta-Serrano et al., 2013)], но они не показали сильного воздействия на теноциты, и обработанные эмбрионы были похожи на братья и сестры.

Подраздел «Микротрубочки необходимы для стабильности и функции теноцитов»: мы добавили оговорку в Обсуждение, признавая глобальные эффекты нокодазола на весь эмбрион и возможность косвенного воздействия на ECM сухожилий и морфологию теноцитов.

5) Лечение ЛП должно проводиться самостоятельно. Может быть, проекции теноцитов зависят как от МТ, так и от F-актина? Наблюдение без улучшения не исключает этого. Если это правда, это также дало бы авторам генетические инструменты для специфического воздействия на актин и, следовательно, на проекции в теноцитах.

5a) Введение ДНК LifeAct приводит к высокой смертности. Однако у немногих выживших эмбрионов F-актин хорошо помечен в другом месте, но нет видимой флуоресценции в проекциях теноцитов, что позволяет предположить, что они лишены актиновых фибрилл.Мы проводили лечение только LifeAct и не наблюдали какого-либо воздействия на теноциты в низких дозах. Кроме того, несколько попыток инъекции F-actin-GFP не показали экспрессии в теноцитах. Следовательно, мы уверены, что F-актин не является основным игроком в росте и поддержании проекции теноцитов. Чтобы избежать дальнейшей путаницы, мы удалили результаты по Латрункулину из рукописи и рисунка.

6) Повсеместная экспрессия и сила Tsp4b-GFP: авторы постулируют, что Tsp4b секретируется теноцитами при генерации силы мышцами.Однако этот эксперимент является проверкой, только если сила влияет на локализацию Tsp4-GFP / Tsp4b, но не на его секрецию теноцитами. Фактически, присутствие (хотя и диффузное) белка Tsp4b у эмбрионов αBTX показывает, что сила не вызывает секрецию Tsp4b как таковую (хотя может усиливать ее).

6a) Несмотря на то, что некоторое количество белка Tsp4b остается в MTJ у парализованных эмбрионов, обработанных αBTX, он, вероятно, продуцируется миобластами до начала сокращения мышц. Ранее мы показали, что Tsp4b сначала экспрессируется по всему миотому на стадии 18 сомитов (20 hpf), до дифференцировки мышц, и только позже становится ограниченным теноцитами после 24 hpf (Subramanian and Schilling, 2014).Предположительно любой белок, синтезируемый на этих ранних стадиях, позже локализуется в MTJ. В соответствии с этим трансплантаты мышечных предшественников локально продуцируют Tsp4b, который может восстанавливать прикрепления мышц (Subramanian and Schilling 2014). Позже выяснилось, что теноциты берут на себя производство Tsp4b и других белков ЕСМ для укрепления и поддержания прикрепления.

6b) Чтобы дополнительно прояснить эту зависимую от силы экспрессию Tsp4b по сравнению с независимой, мы выполнили количественную ПЦР на парализованных эмбрионах, обработанных αBTX, через 24 и 48 часов после оплодотворения.

Подраздел «Проекции теноцитов — датчики силы в ECM сухожилия», второй абзац: Из-за технических проблем с сортировщиком FAC и слабой флуоресценции нашего трансгена через 24 часа после оплодотворения мы не смогли отсортировать теноциты FACS для ПЦР. Поэтому мы выполнили ПЦР-анализ в реальном времени на эмбрионах 24 hpf и 48 hpf (контроль и инъецированных αBtx ). Мы наблюдали значительное снижение экспрессии Tsp4b в образцах αBtx только через 48 часов после оплодотворения. Мы включили эти результаты в рисунок 3 — приложение к рисунку 3.

7) Цветовая шкала кодирования по глубине непоследовательна, иногда розовый = 0 мкм, иногда синий = 0 мкм. Это важно исправить, потому что без согласованной шкалы нельзя судить об изменении длины проекции теноцитов. Кроме того, отрегулируйте масштаб так, чтобы сома теноцитов всегда имела одинаковую глубину / цвет, чтобы судить о дефектах длины.

Из-за ограничений программного обеспечения конфокального микроскопа мы не смогли выбрать диапазон в стеке изображений для получения однородной цветовой кодировки.Вместо этого мы предоставили масштабную полосу, которая использует полосу равномерного градиента, где синий — 0, а красный / желтый — 95 мкм.

8) Количественная оценка флуоресценции антител является сложной задачей / подвержена ошибкам. Соотношение изображений между сигналом mCherry от scx: mCherry и сигналом pSMAD3 было бы полезно для визуализации изменений. Изображение отношения панелей C, разделенных на B, и панелей G, разделенных на F, может быть информативным на рисунках 5 и 6.

Чтобы визуализировать мельчайшие детали проекций, мы должны передержать тела клеток в красном канале (mCherry).Следовательно, мы нормализовали зеленый канал (сигнал pSMAD3) с сигналом фоновой флуоресценции в том же канале. Фоновый сигнал был получен из области интереса, которая была похожа по площади на ядро, но в безъядерной области. Это было сделано вслепую двумя авторами (LK и AS), чтобы избежать предвзятости пользователей. Статистические данные были выполнены с этими новыми нормализованными точками данных.

9) Зависимая от силы экспрессия гена: αBTX выглядит убедительно, но эмбрионы, обработанные SB431542, демонстрируют только умеренное снижение.Нокодазол влияет на экспрессию генов, что противоречит гипотезе / заключению (scx повышается, ctgfa2 повышается — может быть, потому, что нокодазол просто вызывает сильное заболевание эмбрионов?). Если сила индуцирует передачу сигналов TGFβ, которая индуцирует экспрессию гена, то изменения в экспрессии генов должны быть примерно эквивалентными при лечении αBtx (без силы) и SB431542 (без передачи сигналов TGFβ). Это не так, поэтому сила действует не только через передачу сигналов TGFβ (или ингибитор не полностью ингибирует — хотя маловероятно, поскольку pSMAD3 снижается в большей степени, чем при инъекциях αBtx).Поскольку кПЦР является глобальным (и довольно шумным) анализом, есть ли другой способ посмотреть на экспрессию генов (антитела, репортерные трансгены)? Если это так, эмбрионы scx: mCherry-репортер / антитела могут быть проанализированы в различных условиях, а mCh может служить эталоном / нормализацией (однако, не в случае нокодазола).

Хотя наши результаты предполагают, что передача сигналов TGFβ является основным путем механотрансдукции в морфогенезе теноцитов, они не исключают другие пути передачи сигналов, такие как YAP / TAZ и т. Д., который также может индуцировать CTGF. Следовательно, уменьшение силы оказывает более сильное влияние на экспрессию генов, поскольку оно отключает все пути механотрансдукции, в то время как лечение ингибиторами специфически влияет на экспрессию, зависимую от TGFβ. Чтобы решить эту проблему, мы предприняли несколько попыток выделения теноцитов, положительных по mCherry, с помощью FACS. Эксперимент включал диссоциацию эмбрионов для получения клеточной суспензии для сортировки, на что потребовалось около 45 минут ферментативной и механической диссоциации. Процесс сортировки занял еще 2 часа, так как у нас было четыре образца для сортировки для каждого эксперимента.Следовательно, теноциты были диссоциированы от своей естественной среды ECM в течение длительного периода времени, что, как мы полагаем, должно было вызвать стресс у клеток. Следовательно, результаты ddPCR и qPCR для извлеченной РНК показали случайные уровни экспрессии генов (включая гены домашнего хозяйства).

Подраздел «Проекции теноцитов регулируют зависимую от силы экспрессию генов»: Следовательно, мы решили провести реакцию ddPCR на РНК, выделенную из целых эмбрионов, которая показала абсолютные уровни экспрессии генов, которые соответствовали паттерну, наблюдаемому в нашем эксперименте qPCR.Мы включили эти данные ddPCR в рисунок 6 — приложение к рисунку 2.

10) Если инъекция αBTX почти полностью подавляет экспрессию мРНК tsp4b с помощью кПЦР, почему в этих эмбрионах присутствует белок Tsp4b (Рисунок 3 — рисунок в приложении 1)? Снижение уровня белка Tsp4b далеко не так заметно. Можно ли это прояснить? Кроме того, есть ли способ контролировать как начальные уровни экспрессии, так и скорость снижения мРНК у разных эмбрионов? Возможно ли, что электрическая стимуляция не только приводит к восстановлению силы, но и сигнализирует?

Мышечные предшественники продуцируют некоторое количество Tsp4b до дифференцировки (см. Комментарий № 6).Электрическая стимуляция мышечных сокращений у контрольных эмбрионов не влияет на экспрессию генов, что позволяет предположить, что наблюдаемые нами изменения вызваны механической силой. Как упоминалось в ответе на комментарий № 6, мы выполнили кПЦР на ранней эмбриональной стадии — 24 hpf — и более поздней стадии — 48 hpf — как для контрольных, так и для эмбрионов, которым инъецировали αBtx . Мы наблюдаем независимую от силы базальную экспрессию Tsp4b через 24 часа после оплодотворения, аналогичную экспрессии Tsp4b у парализованных 48 hpf эмбрионов. Из нашей предыдущей работы (Subramanian and Schilling, 2014) мы знаем, что Tsp4b устойчиво экспрессируется во всем миотоме до 30 hpf и что эктопическая экспрессия Tsp4b РНК всегда продуцирует белок, который локализуется в MTJs.Следовательно, мы не видим сильной корреляции между уровнем белка и уровнями РНК на более поздних стадиях.

11) Авторы утверждают, что организация ВКМ вертикальной миосепты находится под контролем теноцитов. Однако они рассматривают только один специализированный компонент ECM, тромбоспондин4. Было бы полезно, если бы рисунок 3 мог лучше рассмотреть вопрос о вкладе теноцитов в организацию ECM в целом. Хотя авт. Ранее показали, что Thrombospondin4 является важным регулятором адгезии мышечных клеток, маловероятно, что он является основным компонентом внеклеточного матрикса мышц.Большая часть матрикса уже секретируется непосредственно самими мышцами, и первоначальное прикрепление мышц происходит в отсутствие теноцитов. Как в целом теноциты усиливают или созревают ВКМ? Возможно ли окрашивание двух или более основных компонентов ВКМ в вертикальной миосепте, таких как ламинин, фибронектин или коллаген? TEM также может быть отличным считывающим устройством.

Чтобы измерить влияние силы на другие белки ECM сухожилий, мы выполнили иммуногистохимическое окрашивание на фибронектин (Fn) и ламинин (Lam) у парализованных и стимулированных эмбрионов, что можно сделать за несколько недель.Для TEM потребуется минимум 3-6 месяцев, поскольку у UCI нет оборудования, и мы будем полагаться на базовое оборудование в UCSD (ранее использовавшееся для исследования ультраструктуры MTJ у Tsp4b-дефицитных или стимулированных рыбок данио). Также неясно, может ли ПЭМ-анализ добавить критически важную дополнительную информацию, кроме считывания организации ECM с более высоким разрешением.

Подраздел «Проекции теноцитов — датчики силы в сухожильном ECM», второй абзац: Для анализа дополнительных силозависимых эффектов на организацию MTJ ECM, мы окрашивали белки ламинина и фибронектина, которые были хорошо изучены в контексте развития MTJ.Мы не наблюдали каких-либо значительных изменений в их характере локализации или интенсивности флуоресценции в MTJ для Lam или Fn в контроле по сравнению с эмбрионами, инъецированными αBtx . Мы включили в приложение рисунок, показывающий количественные данные — Рисунок 3 — рисунок в приложении 1. Поскольку предыдущие исследования показали, что Fn секретируется из развивающегося миотома до прикрепления мышц, а затем замещается Lam между 24 и 48 часами после оплодотворения, мы выдвинули гипотезу, что эти компоненты ECM не зависят от механической силы сокращения мышц для их локализации.

12) Анализ изображений / статистика: авторов хвалят за попытки количественно оценить свои данные. Однако представленные подробности не обязательно дают уверенность в том, как данные были проанализированы.

a) В разделе анализа изображений конкретно не рассматривается проблема ослепления, и, конечно же, многие из выполняемых измерений во многом зависят от ввода данных пользователем.

б) Как именно были сегментированы выступы и определена длина ветвей? Это было сделано вручную? Если изображения были сегментированы на Фиджи, то параметры маскировки и т. Д.должно быть подробно.

c) t-критерий подходит для нормальных распределений, было ли это так с полученными данными?

d) Авторы сказали, что анализ мощности был проведен, но все же 3 эмбриона на условия кажутся довольно низкими. Кроме того, как были выбраны 50 точек данных на эмбрион? Всегда ли они были из одного и того же переднезаднего расположения? Выбор этих точек данных также мог быть очень субъективным, и теоретически они должны были быть выбраны случайным образом.

e) Учитывая, что соответствующие детали не были предоставлены, вполне вероятно, что анализ и статистика были выполнены не лучшим образом.Вместо того, чтобы тратить 2 месяца на их повторение, один из вариантов для авторов — предоставить дополнительные данные с несколькими примерами изображений для каждого эксперимента.

1) Мы предоставляем подробный отчет о наших статистических методах и количественной оценке, включая использование плагинов Image J для количественной оценки точек ветвления, измерения длины проекции и т. Д.

2) Мы включили подробное описание всех проведенных статистических тестов и условий для выбора подходящих тестов.Мы проконсультировались со многими статистиками, знакомыми с отбором биологических образцов, чтобы проверить наши статистические тесты.

3) По возможности, мы включили фактические данные в виде точечных графиков, чтобы показать различия внутри и между эмбрионами в каждом образце.

4) Два автора, LK и AS, выполнили измерения из файлов изображений, не зная об идентичности или состоянии образца. Это помогло ограничить предвзятость пользователей.

5) Длина выступа измерялась вручную с помощью Simple Neurite Tracer.Этот плагин позволяет пользователю отображать проекцию в плоскости Z, вычислять длину проекции и обеспечивает визуальное представление трека, выбранного программным обеспечением. Мы сравнили этот трек с реальным путем проекта в 3D-реконструкции, чтобы подтвердить достоверность следов. После подтверждения измерения были записаны для последующего анализа.

6) Перед проведением статистического теста мы вычислили дисперсию и нормальность в выборке. Для образцов, которым не хватало нормальности, мы использовали критерий суммы рангов Вилкоксона.Для экспериментов, в которых сравнивались только два образца, t-тест использовался только тогда, когда была установлена ​​нормальность. Для экспериментов с более чем 2 образцами мы использовали односторонний анализ ANOVA с тестом Tukey Post-Hoc для индивидуальных сравнений, когда была удовлетворена одинаковая дисперсия. В случаях, когда равная дисперсия не удовлетворялась, мы использовали тест Краскела-Уоллиса.

7) Все изображения были получены в аналогичных анатомических точках, между сомитами 16-19 эмбрионов. Мы всегда количественно оценивали наши данные по вентральной VMS (MTJ) в этих 4 сомитах.Datapoints никогда не контролировались пользователем. Мы собрали все данные от каждого теноцита в вентральной VMS — длину проекции, интенсивность флуоресценции, интенсивность флуоресценции pSMAD3. Следовательно, существует различие в количестве точек данных между VMS в эмбрионе и между эмбрионами в одном образце.

Мы предоставили эти описания наших статистических методов в разделе «Материалы и методы».

https://doi.org/10.7554/eLife.38069.043

Матричная металлопротеиназа-7 является биомаркером в моче и патогенным медиатором фиброза почек

Abstract

Матричная металлопротеиназа-7 (ММР-7), секретируемая цинк- и кальций-зависимая эндопептидаза, является транскрипционной мишенью канонического Wnt / β -катенин сигнализация.Поскольку Wnt / β -катенин активируется в пораженной почке, мы предположили, что уровень MMP-7 в моче может использоваться в качестве неинвазивного суррогатного биомаркера фиброзных поражений. Чтобы проверить эту гипотезу, мы провели кросс-секционное исследование, измерив уровни MMP-7 в моче в когорте из 102 пациентов с ХБП. По сравнению с нормальными субъектами у пациентов с различными заболеваниями почек значительно повышен уровень ММР-7 в моче. Кроме того, уровни MMP-7 в моче тесно коррелировали с показателями фиброза почек у пациентов.У мышей нокаут MMP-7 улучшал фиброзные поражения и экспрессию матричных генов, вызванную обструктивным повреждением. Генетическое устранение MMP-7 также сохранило экспрессию белка E-кадгерина и существенно снизило экспрессию общего и дефосфорилированного β -катенина и de novo экспрессию виментина и фибробласт-специфического белка 1 в почечных канальцах почек с закупоркой. In vitro , MMP-7 протеолитически расщепил E-кадгерин в клетках проксимальных канальцев, что привело к высвобождению β -катенина и ядерной транслокации и индукции генов-мишеней β -катенина по механизму, независимому от лигандов Wnt.Наконец, фармакологическое ингибирование MMP-7 сразу после обструктивного повреждения уменьшало почечный фиброз in vivo . Эти результаты предполагают, что MMP-7 может служить не только как неинвазивный биомаркер, но также является важным патогенным медиатором фиброза почек.

ХБП в настоящее время поражает> 10% взрослого населения во всем мире, и заболеваемость продолжает расти. ^1,2 Эффективного лечения ХБП не существует, а прогрессирование до ТПН требует диализа или трансплантации почки. ^3,4 ХБП проявляется стойким функциональным снижением и прогрессирующим фиброзом тканей, характеризующимся неуклонным накоплением внеклеточного матрикса, что приводит к образованию рубцов в паренхиме почек. Хотя функцию почек можно оценить по уровню креатинина в сыворотке и рСКФ, оценка почечного фиброза возможна только с помощью биопсии почек, которую берут у пациентов с помощью инвазивной процедуры. ^5,6 В этом контексте срочно необходима разработка неинвазивного суррогатного биомаркера, который может обнаруживать и контролировать развитие и прогрессирование фиброзных поражений почек. ^7–9 Мы недавно сообщили, что металлопротеиназа-7 матрикса мочи (MMP-7) является суррогатным маркером для прогнозирования внутрипочечной активности Wnt / β -катенина, ключевого фиброгенного сигнального пути, на животных моделях ХЗП. ¹⁰ Однако неизвестно, можно ли использовать MMP-7 в моче в качестве неинвазивного маркера фиброза почек у пациентов с ХБП.

ММР-7, также известная как матрилизин, представляет собой секретируемую цинк- и кальций-зависимую эндопептидазу. ¹¹ Структурно MMP-7 является одним из самых маленьких MMP и синтезируется как неактивный зимоген, состоящий из продомена и каталитического домена. ¹² Активация профермента включает протеолитическое удаление N-концевого прорегиона массой 9 кДа, содержащего мотив переключения цистеина, что приводит к образованию конечного активного фермента массой 19 кДа. Функционально MMP-7 разрушает широкий спектр компонентов внеклеточного матрикса, расщепляет другие субстраты, такие как ассоциированный с клеткой лиганд Fas и E-кадгерин, и активирует другие протеиназы. ^13–16 Способность MMP-7 действовать на такой широкий спектр субстратов делает MMP-7 критически важным игроком в регуляции разнообразных клеточных процессов, таких как ремоделирование матрикса, апоптоз клеток и эпителиально-мезенхимальный переход ( ЕМТ). ^13,17 Играет ли MMP-7 какую-либо роль в патогенезе фиброза почек in vivo , однако, еще предстоит исследовать.

В нормальных почках взрослого человека экспрессия ММР-7 незначительна или не обнаружена; однако его экспрессия заметно индуцируется при множестве ХЗП, включая диабетическую нефропатию, адриамициновую нефропатию, обструктивную нефропатию и хроническую нефропатию аллотрансплантата. ^10,18 Регуляция MMP-7 в почках в первую очередь контролируется транскрипционно с помощью β -катенина, ¹⁰ , основного нижестоящего медиатора канонической передачи сигналов Wnt. ¹⁹ Поскольку активация Wnt / β -катенина является частым патологическим признаком при различных ХБП, ^20–23 мы предположили, что MMP-7, прямая нижестоящая мишень этого сигнального пути, активируется и играет роль роль в патогенезе фиброза почек у пациентов с ХБП.

В этом исследовании мы исследовали экспрессию MMP-7 в образцах мочи и биопсии когорты пациентов с ХБП. Используя нулевых по MMP-7 мышей, мы показали, что эндогенный MMP-7 способствует фиброзу почек, активируя β -катенин через Wnt-независимый путь.Кроме того, мы показали, что фармакологическое ингибирование MMP-7 уменьшало фиброзные поражения почек in vivo после обструктивного повреждения. Наши исследования показывают, что MMP-7 не только может служить неинвазивным биомаркером, но также является патологическим медиатором и терапевтической мишенью фиброза почек.

Результаты

Уровни ММР-7 в моче повышены у людей с ХЗП

ММП-7 обнаруживается и повышается в моче животных моделей ХБП. ¹⁰ Чтобы оценить клиническую значимость этого открытия для ХБП человека, мы измерили уровни ММР-7 в моче в группе из 102 пациентов с различными ХБП и 20 здоровых субъектов с помощью специального ИФА.Диагноз и демографические данные пациентов представлены в дополнительных таблицах 1 и 2. Как показано на рисунке 1A, уровень MMP-7 в моче был заметно повышен у пациентов с различными ХЗП. Примечательно, что уровни MMP-7 в моче тесно коррелировали с тяжестью дисфункции почек (рисунок 1B). У пациентов с нарушением функции почек (СКФ <90 мл / мин на 1,73 м ² ) уровни ММР-7 были резко увеличены по сравнению со здоровыми субъектами или пациентами с относительно нормальной функцией почек (СКФ> 90 мл / мин на 1.73 м ² ) (Рисунок 1Б). Уровни MMP-7 в сыворотке также были немного выше у пациентов с ХБП по сравнению со здоровыми людьми. Однако величина его повышения была незначительной (1,217 ± 0,15 нг / мл у 68 пациентов с ХБП против 0,591 ± 0,045 нг / мл у 20 здоровых субъектов; P = 0,03).

Рисунок 1.

Уровни MMP-7 в моче повышены при ХБП человека. (A) Уровни MMP-7 в моче у пациентов с ХБП ( n = 102) и здоровых субъектов ( n = 20). Уровни MMP-7 в моче выражались в нанограммах на 1 мг креатинина в моче (Ucre.). График показывает значение MMP-7 в моче у отдельных пациентов с ХБП и здоровых людей. * P <0,05. (B) Уровни MMP-7 в моче обратно коррелируют с функцией почек. Значительная разница в уровнях ММР-7 в моче наблюдалась у пациентов с ХБП с рСКФ> 90 или <90 мл / мин на 1,73 м ² . Ctrl, контроль. * P <0,05. ** P <0,01 (C) Типичное иммуногистохимическое окрашивание показывает повышенную экспрессию белка MMP-7 при различных ХЗП человека.Области прямоугольников были увеличены, чтобы показать преобладающую трубчатую локализацию MMP-7. Стрелки указывают на положительно окрашенные почечные канальцы. Контрольная неопухолевая ткань почек пациентов с почечно-клеточной карциномой, использованная в качестве нормального контроля; IgAN, IgA нефропатия; МН - мембранозный нефрит; ТМА, тромботическая микроангиопатия. Масштабная линейка, 50 мкм м.

Далее мы исследовали экспрессию в почках белка MMP-7 с помощью иммуногистохимического окрашивания образцов биопсии почек. Как показано на Рисунке 1C, белок ММР-7 практически не обнаруживается в нормальных почках человека (тестировали два пациента).Однако MMP-7 был заметно индуцирован во всех 10 образцах биопсии от пациентов с ХБП, которые были протестированы. На рис. 1С показаны типичные микрофотографии окрашивания ММР-7 в срезах почек пациентов с IgA-нефропатией, мембранозным нефритом, ФСГС, СКВ и тромботической микроангиопатией. Белок ММР-7 преимущественно локализовался в эпителии почечных канальцев пораженных почек (рис. 1С, желтые стрелки в увеличенных областях). Помимо канальцевых клеток, клубочковые подоциты также были положительными по окрашиванию ММР-7.Эти результаты позволяют предположить, что у пациентов с ХЗП индуцируется экспрессия ММР-7 в почках, что в конечном итоге приводит к повышению уровня ММП-7 в моче.

Уровни MMP-7 в моче коррелируют с фиброзом почек у людей

Поскольку MMP-7 является прямой мишенью Wnt / β -катенина, сигнального пути, который играет центральную роль в фиброгенезе почек, ^24,25 we предположил, что уровни MMP-7 в моче можно использовать в качестве неинвазивного суррогатного биомаркера для прогнозирования и мониторинга фиброза почек.Чтобы проверить эту гипотезу, мы оценили отложение коллагена в почках в образцах биопсии почек пациентов с ХБП с помощью окрашивания трихромом по Массону (MTS). На рис. 2А показаны типичные микрофотографии окрашенных срезов биопсии почки, на которых депонированный коллаген в тубулоинтерстиции окрашен в синий цвет (рис. 2А, стрелки). Уровни MMP-7 в моче приведены в верхней части каждой соответствующей микрофотографии на фиг. 2A. Из 30 пациентов с ХБП, которым были взяты образцы биопсии, наблюдалась тесная корреляция между уровнем ММР-7 в моче и оценкой фиброза почек (рис. 2В).Мы также проанализировали корреляцию экспрессии MMP-7 с рСКФ у пациентов с ХБП. Как показано на рисунке 2C, уровень MMP-7 в моче обратно коррелирует с функцией почек. Точно так же уровни ММР-7 в моче также были связаны с креатинином сыворотки (рис. 2D), уровнями цистатина С в сыворотке (рис. 2Е) и протеинурией (рис. 2, F и G). Корреляция между уровнями MMP-7 в моче и снижением функции почек была особенно четкой у пациентов с почечной недостаточностью (рСКФ <90 мл / мин на 1,73 м ² ) (дополнительный рисунок 1), но не была четкой у пациентов с относительно нормальным состоянием. функция почек (рСКФ> 90 мл / мин на 1.73 м ² ) (дополнительный рисунок 2). Эти данные позволяют предположить, что MMP-7 в моче может служить неинвазивным биомаркером для оценки тяжести фиброза почек и почечной дисфункции у людей.

Рисунок 2.

Уровни MMP-7 в моче коррелируют с фиброзом почек при ХБП человека. (A) Репрезентативные микрофотографии показывают отложение коллагена в почках с помощью MTS в биоптатах почек пациентов с ХБП. Стрелки указывают на положительное окрашивание отложения коллагена (синий). Уровни ММР-7 в моче указаны в верхней части каждой микрофотографии.(B) График разброса с линейной регрессией показывает корреляцию между уровнями MMP-7 в моче и фиброзом почек. Фиброз количественно оценивали на срезах почек MTS тремя людьми, которые не знали данных по MMP-7 в моче. (C) Линейная регрессия показывает обратную корреляцию между уровнями MMP-7 в моче и рСКФ почек. (D и E) Линейная регрессия показывает корреляцию между уровнями MMP-7 в моче и (D) креатинином сыворотки (Scr) и (E) цистатином C. (F и G) Линейная регрессия показывает корреляцию между уровнями MMP-7 в моче и (F) общий белок мочи за 24 часа и (G) альбумин мочи за 24 часа.Показаны коэффициент корреляции Спирмена ( r _s ) и значение P . Ucr, креатинин мочи.

Эндогенный MMP-7 способствует фиброзу почек

Для исследования потенциальной роли MMP-7 в патогенезе почечного фиброза мы использовали мышей с нокаутом MMP-7 (KO), у которых глобально удален ген MMP-7 . Мыши с аблацией MMP-7 были фенотипически нормальными без явных физических или морфологических аномалий. Соответствующие по возрасту и полу мыши дикого типа (WT; MMP-7 + / +) и нулевые по MMP-7 (MMP-7 — / -) на одном генетическом фоне подвергались односторонней обструкции мочеточника (UUO) в течение 7 дней. .Как показано на фиг. 3A, белок MMP-7 заметно индуцировался у мышей MMP-7 + / + через 7 дней после UUO, преимущественно в эпителии почечных канальцев. Как и ожидалось, после обструктивного повреждения у мышей MMP-7 — / — не было обнаружено белка MMP-7. Аналогичные результаты были получены при исследовании лизатов цельной почки с помощью вестерн-блоттинга (фиг. 3, B и C). Следует отметить, что КО MMP-7 не влиял на почечную экспрессию других генов MMP после UUO (фигура 3D). Помимо MMP-7, несколько других MMP, включая MMP-3 (Рисунок 3E) и MMP-10 (Рисунок 3F), а также MMP-2, MMP-4, MMP-8, MMP-9 и MMP-14 ( данные не показаны), индуцировались у мышей MMP-7 + / + через 7 дней после UUO по сравнению с фиктивными контролями, тогда как экспрессия MMP-13 подавлялась (фигура 3G).Однако удаление MMP-7 у мышей KO не влияло на экспрессию всех других MMPs в почках с обструкцией после UUO по сравнению с контролем WT (Рисунок 3, D – G).

Рисунок 3.

MMP-7 индуцируется в фиброзных почках после UUO, и его дефицит не влияет на почечную экспрессию других MMP. (A) Репрезентативное иммуногистохимическое окрашивание показывает повышенную экспрессию MMP-7, преимущественно в почечных канальцах почек с закупоркой, через 7 дней после UUO у мышей MMP-7 + / +, но не у мышей MMP-7 — / -.Штучные области были увеличены. Стрелки указывают на почечные канальцы. Масштабная линейка, 50 мкм м. (B и C) Вестерн-блоттинг почечного белка MMP-7 при обструктивной нефропатии. Лизаты почек получали из мышей MMP-7 + / + (WT) и MMP-7 — / — (KO) через 7 дней после UUO и проводили иммуноблоттинг с использованием специфических антител против MMP-7 и актина, соответственно. Представлены репрезентативные (B) Вестерн-блоттинг и (C) количественные данные. Были показаны как про-ММП-7, так и активный ММП-7. Цифры (1 и 2) обозначают каждое отдельное животное в данной группе ( n = 5).** P <0,01 по сравнению с WT. (D) Анализы RT-PCR показывают, что делеция MMP-7 не влияла на почечную экспрессию других MMP через 7 дней после UUO. (E – G) Количественный анализ ОТ-ПЦР в реальном времени подтвердил небольшую разницу в экспрессии мРНК почек (E) MMP-3, (F) MMP-10 и (G) MMP-13 между MMP-7 + / + и MMP -7 - / - мышей через 7 дней после УУО.

Затем мы исследовали фиброз почек после обструктивного повреждения у мышей без MMP-7 и их коллег WT. Как показано на фиг. 4, A и B, MTS выявила значительное отложение коллагена и почечный интерстициальный фиброз в почках с обструкцией почек мышей WT через 7 дней после UUO (фиг. 4A, стрелки).Однако удаление MMP-7 у нулевых мышей существенно уменьшало почечные фиброзные поражения (рис. 4, A и B). Анализ экспрессии генов с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени показал, что экспрессия мРНК коллагена 1 типа заметно индуцировалась у мышей WT после UUO и что делеция MMP-7 ослабляла ее индукцию (рис. 4C). Вестерн-блоттинг лизатов цельной почки также показал, что экспрессия фибронектина и белков α -гладкомышечного актина ( α -SMA) была снижена в почках с обструкцией у мышей MMP-7 — / — по сравнению с контрольной группой WT ( Рис. 4, Г – Е).Удаление MMP-7 также уменьшило отложение фибронектина в почках с обструкцией через 7 дней после UUO (рис. 4G). Эти данные показывают, что ММП-7 не только является биомаркером фиброза почек, но также действует как патогенный медиатор, который способствует фиброзу почек.

Рисунок 4.

Эндогенный MMP-7 способствует фиброзу почек после обструктивного повреждения. (A и B) Удаление MMP-7 у мышей (MMP-7 — / -) улучшило фиброз почек после UUO. (A) Типичные микрофотографии показывают MTS почек с обструкцией через 7 дней после UUO в различных группах, как указано.Стрелки указывают отложение коллагена. Масштабная линейка, 50 мкм м. Количественное определение фиброзных поражений почек в различных группах представлено в B. Фиброзные поражения почек (определяемые как процент MTS-положительной фиброзной области) количественно оценивались на MTS-срезах с помощью компьютерных морфометрических анализов. * P <0,05 по сравнению с контролями дикого типа ( n = 5). (C) Количественные анализы ОТ-ПЦР в реальном времени показывают снижение экспрессии мРНК коллагена типа 1 у мышей MMP-7 — / — через 7 дней после UUO по сравнению с контролями MMP-7 + / +.* P <0,05 по сравнению с контролями MMP-7 + / + ( n = 5). (D – F) Вестерн-блоттинг показывает, что делеция MMP-7 снижает экспрессию в почках фибронектина (Fn) и α -SMA через 7 дней после UUO. Представлены репрезентативные (D) Вестерн-блоттинг и (E и F) количественные данные. Цифры (1–4) обозначают каждое отдельное животное в данной группе. * P <0,05 по сравнению с контролями MMP-7 + / + (WT) ( n = 5). (G) Типичные микрофотографии показывают экспрессию белка Fn в различных группах, как указано.Срезы почек иммуноокрашивали специфическими антителами против Fn. Стрелки указывают на положительное окрашивание. Масштабная линейка, 50 мкм м.

Эндогенный MMP-7 нарушает целостность канальцевых клеток

In vivo

Более ранние исследования in vitro показали, что MMP-7 протеолитически отторгает внеклеточный домен E-кадгерина, ¹⁰ , что приводит к нарушению целостности эпителиальных клеток. В этом направлении мы исследовали потенциальную взаимосвязь между MMP-7 и E-cadherin в почках с закупоркой in vivo .Как показано на фиг. 5, A и B, вестерн-блоттинг лизатов цельной почки показал, что потеря MMP-7 у мышей KO привела к повышенной экспрессии в почках белка E-кадгерина через 7 дней после UUO по сравнению с контролем WT. Иммунофлуоресцентное окрашивание показало, что, хотя почечный белок E-кадгерин исчез после UUO у мышей MMP-7 + / +, его экспрессия и локализация в значительной степени сохранялись у мышей MMP-7 — / — (рис. 5C). Интересно, что, несмотря на заметное увеличение белка E-кадгерина у мышей MMP-7 — / -, уровни мРНК E-кадгерина в почках у этих мышей существенно не отличались от контрольных MMP-7 + / + (фиг. 5D).Эти результаты предполагают, что сохранение E-cadherin у MMP-7 — / — мышей после UUO в первую очередь является результатом снижения протеолитического шеддинга белка E-cadherin, а не увеличения экспрессии его мРНК.

Рисунок 5.

Эндогенный MMP-7 нарушает целостность канальцевых клеток при обструктивной нефропатии. (A и B) Удаление MMP-7 у мышей с сохранением канальцевого белка E-кадгерина. Экспрессию почечного белка E-кадгерина оценивали с помощью вестерн-блоттинга через 7 дней после UUO. Представлены репрезентативные (A) Вестерн-блоттинг и (B) количественные данные.Цифры (1–4) обозначают каждое отдельное животное в данной группе. * P <0,05 по сравнению с WT ( n = 5). (C) Типичные микрофотографии показывают почечную экспрессию E-кадгерина и Fsp1 в различных группах, как указано. E-кадгерин оценивали с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания, тогда как Fsp1 определяли с помощью иммуногистохимического окрашивания. Стрелки указывают на положительное окрашивание. Масштабная линейка, 50 мкм м. (D) Количественный анализ RT-PCR в реальном времени показывает, что удаление MMP-7 у мышей не влияет на экспрессию мРНК E-кадгерина в почках через 7 дней после UUO.* P <0,05 по сравнению с фиктивным контролем ( n = 5).

Потеря E-кадгерина нарушит целостность эпителиальных клеток канальцев, что часто сопровождается приобретением мезенхимальных маркеров. ^10,26 Таким образом, мы также исследовали экспрессию фибробласт-специфического белка 1 (Fsp1), также известного как S100A4, цитоплазматического кальций-связывающего белка, который высоко экспрессируется в фибробластах и ​​эпителиальных клетках, подвергающихся EMT. ²⁷ Как показано на фиг. 5C, UUO вызывает значительную индукцию Fsp1 в эпителии почечных канальцев у мышей WT.Однако удаление MMP-7 у мышей KO в значительной степени устраняет канальцевую экспрессию Fsp1 после обструктивного повреждения. Аналогичные данные были получены при оценке мРНК Fsp1 (данные не показаны).

Эндогенная ММР-7 способствует активации

β -катенина

Поскольку E-кадгерин физически связан с β -катенином в нормальных эпителиальных клетках, MMP-7-опосредованная протеолитическая деградация E-кадгерина может привести к диссоциации этот комплекс, тем самым приводя к высвобождению и активации β -катенина.Чтобы проверить эту гипотезу, мы исследовали активацию β -катенина в почках с обструкцией как у мышей WT, так и у мышей MMP-7 KO. Как показано на фиг.6, A, B и D, β -катенин резко активизировался у мышей WT, преимущественно в эпителии канальцев почек, через 7 дней после UUO, тогда как генетическое удаление MMP-7 у мышей KO отменяло β. Индукция -катенина в почках с закупоркой. Сходные результаты были получены при оценке дефосфорилированного активного β -катенина (данные не показаны), предполагая, что сохранение E-кадгерина у мышей с нулевым MMP-7 предотвращает почечную активацию β -катенина после обструктивного повреждения.Двойное иммунофлуоресцентное окрашивание дополнительно подтвердило совместную локализацию MMP-7 и β -катенина в эпителии почечных канальцев через 7 дней после UUO у мышей WT (дополнительная фигура 3).

Рисунок 6.

Эндогенная ММР-7 активирует β -катенин и его нижележащие гены-мишени при обструктивной нефропатии. (A – C) Вестерн-блоттинг показывает снижение экспрессии белка β -катенина и виментина у мышей MMP-7 — / — через 7 дней после UUO по сравнению с контролями MMP-7 + / +. Представлены репрезентативные (A) Вестерн-блоттинг и (B и C) количественные данные ( n = 5).Цифры (1–4) обозначают каждое отдельное животное в данной группе. * P <0,05 по сравнению с контролями дикого типа. (D) Типичные микрофотографии показывают почечную экспрессию β -катенина и виментина в различных группах, как указано. Белки β -катенин и виментин были обнаружены иммуногистохимическим окрашиванием. Стрелки указывают на положительное окрашивание почечных канальцев. Масштабная линейка, 50 мкм м. (E и F) KO MMP-7 также ингибировал экспрессию PAI-1 и Snail1. Представлены количественные данные, показывающие уровни белка в почках (E) PAI-1 и (F) Snail1 через 7 дней после UUO.* P <0,05 по сравнению с контролями дикого типа ( n = 5).

Недавние исследования показали, что активация β -катенина играет решающую роль в стимуляции активации фибробластов и фиброза почек. ^23,24 Чтобы изучить эту возможность, мы исследовали экспрессию виментина, маркера активации фибробластов. ³ Как показано на фиг. 6, A и C, генетическое устранение MMP-7 у мышей KO в значительной степени устраняет экспрессию виментина, вызванную обструктивным повреждением. Особый интерес представляет иммуногистохимическое окрашивание, которое показало, что виментин в значительной степени локализуется в канальцевом эпителии пораженных почек после UUO у мышей WT (фигура 6D, стрелки), но не у мышей MMP-7 KO.Соответственно, экспрессия других белков, связанных с фиброзом, таких как Snail1 и ингибитор активатора плазминогена-1 (PAI-1), также подавлялась у мышей MMP-7 — / — через 7 дней после UUO по сравнению с контролем WT (рис. 6, E и F). Эти результаты предполагают, что устранение ММР-7 существенно ингибирует активацию β -катенина и экспрессию генов, связанных с фиброзом.

MMP-7 активирует передачу сигналов

β -катенина In Vitro

Чтобы выяснить механизм, с помощью которого MMP-7 способствует фиброзу почек, мы изучили активацию β -катенина MMP-7 in vitro с помощью культивировали клетки проксимального канальцевого эпителия почек человека (HKC-8), поскольку все больше данных свидетельствует о том, что Wnt / β -катенин играет ключевую роль в почечном фиброгенезе. ²⁴ Как показано на фиг. 7A, инкубация клеток HKC-8 с рекомбинантным белком MMP-7 резко снижает окрашивание E-кадгерина, предположительно в результате протеолитического отщепления его внеклеточных доменов, как сообщалось ранее. ¹⁰ Между тем, MMP-7 индуцировал перераспределение β -катенина, что приводило к его ядерному накоплению в клетках HKC-8 (фигура 7A, стрелки). Совместная локализация MMP-7 и β -катенина также наблюдалась в клетках HKC-8 после стимуляции TGF- β 1 (дополнительная фигура 4).Мы дополнительно исследовали локализацию β -катенина в различных клеточных компартментах с помощью вестерн-блоттинга после субклеточного фракционирования. Как показано на фиг. 7, B и C, MMP-7 резко индуцировал накопление в ядре β -катенина, в то время как он одновременно снижал содержание β -катенина в цитоплазме. Соответственно, инкубация с ММР-7 уменьшала образование комплекса E-кадгерин / β -катенин в клетках HKC-8, как показывает коиммунопреципитация (фигура 7D).Соответственно, MMP-7 увеличивал связывание β -катенина с фактором связывания лимфоидного энхансера ядерного фактора транскрипции 1 (LEF1) (фигура 7E).

Фигура 7.

MMP-7 активирует β -катенин, запуская деградацию E-кадгерина in vitro . (A) Иммунофлуоресцентное окрашивание показывает, что экзогенный MMP-7 разрушает E-кадгерин и способствует транслокации β -катенина в ядро ​​ in vitro . Клетки HKC-8 инкубировали с рекомбинантным белком MMP-7, как указано.Затем клетки иммуноокрашивали на β -катенин и E-кадгерин. Ядра клеток визуализировали окрашиванием 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI). Стрелки указывают на положительное окрашивание β -катенин. (B и C) ММР-7 индуцировала ядерную транслокацию β -катенин. (B) Ядерные и (C) цитоплазматические белки получали субклеточным фракционированием из клеток HKC-8, инкубированных без или с MMP-7, как указано. (B) ядерный и (C) цитоплазматический лизаты иммуноблотировали с антителами против β -катенина, ТАТА-связывающего белка (ТВР) или панспецифического актина.с- β -катенин, цитоплазматический β -катенин; Ctrl, контроль; n- β -катенин, ядерный β -катенин. (D и E) Коиммунопреципитация показывает, что ММР-7 снижает ассоциацию β -катенин / E-кадгерин и способствует образованию комплекса β -катенин / LEF1. Лизаты клеток HKC-8, инкубированные без или с ММР-7, подвергали иммунопреципитации (IP) антителами против E-кадгерина или LEF1 с последующим иммуноблоттингом (IB) с антителами против β -катенина, E-кадгерина или LEF1, как указано. .(F и G) Ферментативная активность требуется для ММР-7, чтобы индуцировать β -катенин гены-мишени in vitro . (F) анализы RT-PCR и (G) вестерн-блоттинг показали, что ММР-7 индуцировала мРНК и экспрессию белка β -катенина нижележащих целевых генов MMP-7 и PAI-1 , которые блокировались Ингибитор ММП II, но не GM6001. (H) Схематическая диаграмма изображает потенциальный путь, по которому MMP-7 активирует β -катенин. TCF, Т-клеточный фактор.

Далее мы оценили влияние MMP-7 на экспрессию β -катенин нижележащих генов-мишеней. Как показано на фиг. 7F, ММР-7 значительно способствовала экспрессии мРНК β -катениновых генов-мишеней, таких как PAI-1 и сама MMP-7 . Это действие MMP-7 явно зависело от его протеолитической активности, поскольку специфический ингибитор MMP-7 (ингибитор MMP 2), но не ингибитор MMP-2 / MMP-9 (GM6001), полностью отменял индукцию мРНК PAI-1. и MMP-7 (Рисунок 7F).Сходные результаты были получены при оценке белков MMP-7 и PAI-1 с помощью вестерн-блоттинга (фигура 7G). Взятые вместе, как показано на рисунке 7H, MMP-7, через его протеолитическую активность, разлагает E-кадгерин, который высвобождает β -катенин и вызывает его транслокацию в ядра, где он связывается с LEF1 и стимулирует экспрессию его гены-мишени.

Активация

β -катенина MMP-7 не зависит от Wnt

Поскольку β -катенин является главным внутриклеточным медиатором канонической передачи сигналов Wnt, мы затем проверили, участвует ли Wnt в опосредованной MMP-7 β. Активация -катенина с использованием репортерного анализа люциферазы TOPFlash.Как показано на фиг. 8A, инкубация клеток HKC-8 с MMP-7 активировала β -катенин и индуцировала активность репортера люциферазы, как и ожидалось. Обработка клеток HKC-8 с помощью ICG-001, низкомолекулярного ингибитора, который блокирует транскрипцию гена, опосредованного β -катенином, ^28,29 эффективно отменяет индуцированную MMP-7 транскрипцию гена. Однако мы обнаружили, что растворимый Klotho (sKlotho), эндогенный антагонист Wnt, который связывается с лигандами Wnt и изолирует их, ³⁰ не оказывает значительного влияния на опосредованную MMP-7 экспрессию люциферазы, что позволяет предположить, что опосредованная MMP-7 экспрессия β Гены-мишени -catenin не требуют участия Wnt.Точно так же экспрессия генов-мишеней β -катенина, индуцированная MMP-7, может подавляться с помощью ICG-001, но не может подавляться sKlotho (фиг. 8, B и C). Кроме того, MMP-7 может индуцировать экспрессию α -SMA в клетках HKC-8, которая устраняется ICG-001 и ингибитором MMP 2 (фиг. 8). Взятые вместе, эти результаты предполагают, что ММР-7 активирует β -катенин по Wnt-независимому механизму.

Фигура 8.

β -катенин-активация, индуцированная MMP-7, не зависит от передачи сигналов Wnt.(A) MMP-7 активирует транскрипцию гена, опосредованного β -катенином, по Wnt-независимому механизму. Клетки HKC-8 котрансфицировали репортерной плазмидой TOP-Flash в отсутствие или в присутствии секретируемой плазмиды экспрессии Klotho (pV5-sKlotho) или ICG-001. Люциферазную активность оценивали и сообщали как кратную индукцию по сравнению с контролями. * P <0,05 по сравнению с контролем; ^† P <0,05 по сравнению с одним MMP-7 или MMP-7 плюс sKlotho ( n = 3). (B) Анализы RT-PCR показывают, что экспрессия мРНК MMP-7, индуцированная MMP-7, не ингибируется sKlotho.(C) Вестерн-блоттинг показывает, что блокада передачи сигналов Wnt с помощью sKlotho не устраняет аутоиндукцию, опосредованную MMP-7. Клеточные лизаты подвергали иммуноблоттингу с использованием антител против ММР-7 и α -тубулина. (D) Типичные микрофотографии показывают, что MMP-7 индуцировал α -SMA в клетках HKC-8. Клетки иммуноокрашивали на α -SMA после различных обработок, как указано. Стрелки указывают на положительное окрашивание.

Фармакологическое ингибирование MMP-7 ослабляет почечный фиброз

In vivo

Принимая во внимание важную роль эндогенного MMP-7 в развитии почечного фиброза, мы наконец исследовали, может ли ингибирование MMP-7 уменьшить фиброзные поражения после обструктивного поражения. травма, повреждение.С этой целью мышам внутрибрюшинно вводили ингибитор ММП II, низкомолекулярный ингибитор ММП-7, сразу после UUO. Как показано на фиг. 9, A и B, ингибирование MMP-7 по существу подавляло экспрессию мРНК коллагена 1 в почках через 7 дней после UUO по сравнению с контрольными носителями. Аналогичным образом, ингибирование ММР-7 in vivo также снижает экспрессию белка фибронектина и α -SMA в почках с закупоркой, что выявлено с помощью вестерн-блоттинга лизатов цельной почки (фиг. 9, C и D).Это ингибирование почечного фиброза ингибитором MMP-7 было связано с уменьшением β -катенина in vivo (Фиг.9, C и D). Иммунофлуоресцентное окрашивание также показало повышенное отложение белков фибронектина и коллагена 1 в почках с обструкцией через 7 дней после UUO, которое было существенно снижено за счет ингибирования MMP-7 (фиг. 9E). Эти результаты предполагают, что ММП-7 также является новой терапевтической мишенью, и ее ингибирование обеспечивает защиту почек от развития фиброза почек.

Рисунок 9.

Фармакологическое ингибирование MMP-7 ослабляет почечный фиброз после обструктивного повреждения. (A и B) Инъекции ингибитора MMP-7 подавляли экспрессию мРНК почечного коллагена 1 через 7 дней после UUO. (A) RT-PCR и (B) количественные данные представлены ( n = 6-7). Цифры (1–7) обозначают каждое отдельное животное в данной группе. * P <0,05 по сравнению с фиктивными контролями; ^† P <0,05 по сравнению с контролями UUO. (C и D) Вестерн-блоттинг показывает, что ингибирование экспрессии белка MMP-7 репрессированного почечного фибронектина, α -SMA и β -катенина через 7 дней после UUO.Представлены репрезентативные (C) Вестерн-блоттинг и (D) количественные данные. Цифры (1–3) обозначают каждое отдельное животное в данной группе. * P <0,05 по сравнению с фиктивными контролями; ^† P <0,05 по сравнению с контролем UUO ( n = 6–7). (E) Типичные микрофотографии показывают, что ингибирование MMP-7 снижает экспрессию в почках фибронектина и белков α -SMA через 7 дней после UUO. Клетки иммуноокрашивали на фибронектин и α -SMA после различных обработок, как указано.Стрелки указывают на положительное окрашивание. Масштабная линейка, 50 мкм м.

Обсуждение

В настоящее время для оценки фиброза почек у пациентов с ХБП необходимы образцы биопсии почек, которые получают только с помощью инвазивной процедуры. ^5,6 Таким образом, чрезвычайно сложно, если не невозможно, отслеживать динамику фиброзного процесса, которая может предсказать исходы пациента и позволить оценить эффективность лечения в клинических условиях. В этом исследовании мы показываем, что уровни ММР-7 в моче тесно коррелируют с тяжестью фиброзных поражений почек, тем самым обеспечивая неинвазивный суррогатный биомаркер фиброза почек у пациентов с ХБП.Кроме того, используя мышей MMP-7 — / — KO, у которых полностью удален эндогенный ген MMP-7 , мы предоставили недвусмысленные доказательства того, что MMP-7 является важным патогенным медиатором, который запускает активацию β -катенина. сигнализирует и способствует фиброзу почек. Наконец, мы показываем, что фармакологическое ингибирование активности ММР-7 низкомолекулярным ингибитором защищает почки от развития фиброзных поражений in vivo . Эти исследования устанавливают, что ММР-7, секретируемая протеаза и транскрипционная мишень передачи сигналов Wnt / β -катенин, не только может служить неинвазивным биомаркером, но также является патологическим медиатором и терапевтической мишенью фиброза почек.

ММП-7 — одна из самых маленьких ММП, преимущественно локализуется в эпителии канальцев почек и легко выводится с мочой. В патологических условиях резко индуцируется экспрессия MMP-7 (рисунки 1 и 3), которая в первую очередь контролируется на уровне транскрипции с помощью Wnt / β -катенин, ¹⁰ , сигнальный путь, который активируется практически при всех типах ХЗП. . ^19,20 Ранее мы показали, что ММР-7 в моче является маркером для прогнозирования внутрипочечной активности Wnt / β -катенина на животных моделях ХБП. ¹⁰ В соответствии с этим представлением, уровни MMP-7 в моче также повышены у пациентов с ХБП, независимо от исходной этиологии (рис. 1). Более того, MMP-7 в моче надежно отражает его экспрессию в почечной паренхиме, особенно в канальцевом эпителии (рис. 1). Интересно отметить, что уровень ММР-7 в моче уже значительно повышен у пациентов, когда почечная недостаточность является легкой (рСКФ> 90 мл / мин на 1,73 м ² ) и не имеет сильного тканевого фиброза. Следовательно, можно предположить, что MMP-7 в моче может быть ранним биомаркером, предшествующим фиброзным поражениям.Ограничения этого исследования включают относительно небольшой размер выборки и характер поперечного наблюдения, что исключает возможность продольной оценки корреляции между MMP-7 и фиброзом почек после различных курсов лечения. Очевидно, что в будущем необходимы более энергичные, крупномасштабные и продольные исследования по подтверждению ММП-7 как неинвазивного биомаркера фиброза почек.

Одним из новых открытий в этом исследовании является то, что MMP-7 является не только биомаркером почечного фиброза, но также и основным патогенным медиатором в развитии фиброзных поражений.Мыши с генетическим удалением MMP-7 в значительной степени защищены от развития фиброзных поражений почек после UUO, с гораздо меньшим накоплением и отложением коллагена 1 и фибронектина в почечной паренхиме и сниженной активацией миофибробластов (Рисунок 4). Этот результат согласуется с более ранними наблюдениями о том, что ММР-9 является вредным для почечного фиброгенеза. ^31,32 Хотя часто предполагается, что ММП полезны, способствуя деградации матрикса при фиброзных нарушениях, все больше данных свидетельствует о том, что эти протеазы могут влиять на фиброзный процесс либо положительно, либо отрицательно, воздействуя на различные наборы белков-субстратов для деградации. ^11,17 Стоит отметить, что, поскольку MMP-7 является нижестоящей мишенью Wnt / β -катенина, наши данные о пагубной роли эндогенного MMP-7 подчеркивают новый механизм, с помощью которого Wnt / Передача сигналов β -катенина способствует фиброзу почек.

Молекулярный механизм, лежащий в основе патогенного действия MMP-7, скорее всего, связан с его способностью стимулировать ЕМП путем разрушения E-кадгерина, рецептора адгезии, который необходим для поддержания целостности эпителиальных клеток.KO MMP-7 не влияет на экспрессию мРНК E-cadherin, но существенно сохраняет белок E-cadherin и его канальцевую локализацию после UUO (Рисунок 5), что согласуется с более ранними наблюдениями in vitro о том, что MMP-7 индуцирует шеддинг эктодомена E-cadherin. ^10,13 Потеря эпителиального E-cadherin была предложена как начальная стадия EMT, ²⁶ и, следовательно, MMP-7-опосредованная деградация E-cadherin, как ожидается, будет способствовать фенотипическому переходу канальцевых эпителиальных клеток. Действительно, de novo экспрессия Fsp1 и виментина, двух мезенхимальных маркеров, которые часто используются в области EMT, ^26,27 очевидна в канальцевом эпителии у мышей MMP-7 + / +, но не в MMP-7 — / — мышей (рисунки 5 и 6).Эти данные показывают, что эпителиальные клетки канальцев у мышей MMP-7 + / + после UUO, по крайней мере, подвергаются частичной EMT, при которой они экспрессируют маркеры как эпителиальных, так и мезенхимальных клеток, но остаются в канальцевом компартменте. ^33,34 Становится ясно, что эндогенный MMP-7 играет роль в этом частичном процессе EMT, потому что его дефицит сохраняет целостность канальцевых клеток (Рисунки 5 и 6). Следует отметить, что, хотя остается спорным вопрос о том, существует ли полная ЭМП при фиброзных почках, недавние исследования ^35–37 предоставили доказательства частичных фенотипических изменений ЭМП. ^33,34 Такая частичная ЭМП крайне важна и необходима для стимулирования развития фиброза после различных травм. ³⁸

Одним из следствий опосредованной MMP-7 деградации E-cadherin является высвобождение β -catenin, потому что он обычно связывается с E-cadherin в комплексе клеточной адгезии. Освободившийся β -катенин затем перемещается в ядро ​​в качестве регулятора транскрипции и управляет экспрессией своих генов-мишеней, таких как PAI-1 и сам MMP-7. ^10,39 Эту серию событий можно повторить in vitro , потому что MMP-7 вызывает усиленное взаимодействие β -катенин / LEF1 и активирует экспрессию мРНК MMP-7 и PAI-1 (рис. 7). Как показано на фиг. 7G, благодаря способности индуцировать собственную экспрессию, MMP-7 участвует в цикле самораспространения, который приводит к аутоамплификации передачи сигналов β -катенин. Как и ожидалось, этот способ активации β -катенина требует протеазной активности MMP-7, но не зависит от лигандов Wnt (фиг. 8).Таким образом, наши исследования подчеркивают, что, помимо лигандов Wnt, эндогенный MMP-7 является важным регулятором, который опосредует активацию и амплификацию передачи сигналов β -catenin в пораженных почках.

Наши исследования также показывают, что MMP-7 может быть терапевтической мишенью для лечения фиброзной ХБП. Используя селективный низкомолекулярный ингибитор MMP-7, мы показали, что блокада активности MMP-7 подавляет экспрессию в почках коллагена 1 и фибронектина и снижает активацию миофибробластов (рис. 9).Несмотря на то, что вместе взятые необходимы дополнительные исследования, наши результаты подтверждают принцип, согласно которому MMP-7 не только может служить неинвазивным биомаркером, но также является патогенным медиатором и терапевтической мишенью фиброза почек.

Краткие методы

Образцы биопсии мочи и почек человека

Образцы мочи и сыворотки человека, а также образцы почек были получены при диагностической биопсии почек, выполненной в больнице Наньфанг Южного медицинского университета. Некоторые образцы мочи и сыворотки крови были также получены от здоровых добровольцев.Образцы мочи после центрифугирования для удаления остатков мочи разделяли на аликвоты и хранили при -80 ° C. Залитые в парафин биопсийные срезы почек человека (2,5- мкм толщиной м) были приготовлены с использованием стандартной процедуры. Неопухолевую ткань почек пациентов с почечно-клеточным раком, перенесших нефрэктомию, использовали в качестве нормального контроля. Все исследования с участием образцов почек человека были одобрены этическим комитетом Южного медицинского университета и институциональным наблюдательным советом Питтсбургского университета.

Животные модели

Мышей MMP-7 KO с генетическим фоном C57BL / 6J были получены из лаборатории Джексона (Stock 005111; Bar Harbor, ME). Соответствующие по возрасту и полу мышей C57BL / 6J от того же производителя использовали в качестве контроля WT. UUO выполнялся с использованием установленного протокола, как описано в другом месте. ²⁴ Мочеточники мышей, подвергшихся ложной операции, обнажали и подвергали манипуляциям, но не лигировали. Мышей умерщвляли через 7 дней после UUO ( n = 5), и ткани почек собирали для различных анализов.Для оценки терапевтической эффективности ингибирования ММР-7 в отношении фиброза почек использовали три группы мышей: ( 1 ) фиктивный контроль ( n = 6), ( 2 ) UUO, инъецированный носителем ( n = 7) и ( 3 ) UUO, инъецированный ингибитором ММП II ( n = 6). Мышам ежедневно внутрибрюшинно вводили носитель (PBS) или ингибитор ММП II (444247; EMD Chemicals, Гиббстаун, Нью-Джерси) в дозе 1 мг / кг массы тела, начиная со второго дня после операции. Мышей умерщвляли через 7 дней после UUO и анализировали ткани почек.Все исследования на животных проводились с использованием процедур, одобренных Комитетом по уходу и использованию животных в Университете Питтсбурга и Комитетом по этике животных в больнице Нанфанг Южного медицинского университета.

Культура клеток и обработка

Клеточная линия HKC-8 была предоставлена ​​Л. Ракузеном из Университета Джона Хопкинса (Балтимор, Мэриленд). Клетки культивировали в среде DMEM / F12 с добавлением 10% телячьей сыворотки, как описано ранее. ⁴⁰ Клетки HKC-8, лишенные сыворотки, стимулировали рекомбинантным белком MMP-7 человека (444270; EMD Chemicals) в различных дозах в отсутствие или в присутствии различных ингибиторов, таких как ICG-001-фосфат (предоставленный M.Кан, Университет Южной Калифорнии, Лос-Анджелес, Калифорния), GM6001 (CC1000; EMD Millipore, Billerica, MA) и ингибитор MMP II (444247; EMD Chemicals). Затем клетки подвергали иммунофлуоресцентному окрашиванию, ОТ-ПЦР, иммунопреципитации и Вестерн-блоттингу.

MMP-7 ELISA

Набор для ELISA Human Total MMP-7 Quantikine был приобретен у R&D Systems (DMP700; Миннеаполис, Миннесота). В этом анализе используется метод количественного иммуноферментного анализа «сэндвич». На микропланшет предварительно наносили mAb, специфичное к человеческому ММР-7.Стандарты и образцы переносили пипеткой в ​​лунки, и ММР-7, присутствующая в образце, связывалась с лунками иммобилизованным антителом. После смывания несвязавшихся веществ в лунки добавляли поликлональные антитела, связанные с ферментом, специфичные к человеческому ММР-7. После промывки для удаления несвязанного реагента антитело-фермент в лунки добавляли раствор субстрата, и цвет развивался пропорционально количеству общего ММР-7 (про и / или активного), связанного на начальной стадии. Развитие окраски прекращали и измеряли интенсивность окраски.Уровни MMP-7 в моче были рассчитаны после нормализации креатинина в моче и выражены в нанограммах на 1 мг креатинина. Сывороточный MMP-7 также анализировали и выражали в нанограммах на миллилитр.

Полуколичественная оценка MTS

Биопсии почек от пациентов с ХБП различной этиологии подвергались MTS стандартными процедурами. Окрашенные слайды наблюдали под микроскопом, и были взяты изображения из случайно выбранных полей. Каждое изображение (× 400; 21,67 см [длина] × 17.34 см [ширина]) был разделен на 100 квадратов с площадью каждого квадрата 3,77 см ² . Фиброз тканей, определяемый по окрашиванию в синий цвет, оценивали три опытных наблюдателя слепым методом. Был рассчитан процент синего окрашивания на каждом изображении и сообщены средние значения оценок фиброза от трех наблюдателей.

Гистология и иммуногистохимическое окрашивание

Залитые парафином срезы почек мыши (толщина 3- мкм, мкм) получали обычным способом.Срезы окрашивали трихромным реагентом Массона. Иммуногистохимическое окрашивание проводили с использованием стандартных протоколов. Использовались следующие антитела: кроличьи поликлональные анти-MMP-7 (GTX11603; GeneTex, Irvine, CA), мышиные моноклональные анти-MMP-7 (GTX17854; GeneTex), кроличий поликлональный антивиментин (5741s; Cell Signaling Technology, Danvers, MA). , кроличьи поликлональные анти-FSP1 (S100A4; A5114; DAKO, Carpinteria, CA), кроличьи поликлональные анти– β -катенин (ab15180; Abcam, Inc., Кембридж, Массачусетс) и мышиные анти– α -SMA ( A2547; Sigma-Aldrich, St.Луис, Миссури). После инкубации с первичными антителами при 4 ° C в течение ночи слайды затем окрашивали вторичным антителом, конъюгированным с пероксидазой хрена (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA). Неиммунный нормальный IgG использовали для замены первичных антител в качестве отрицательного контроля, и окрашивания не наблюдалось. Слайды просматривали под микроскопом Nikon Eclipse E600, оснащенным цифровой камерой (Nikon, Токио, Япония).

Иммунофлуоресцентное окрашивание и конфокальная микроскопия

Криосрезы почек фиксировали с помощью 3.7% параформалин в течение 15 минут при комнатной температуре. Клетки HKC-8, культивированные на покровных стеклах, фиксировали холодным метанолом: ацетоном (1: 1) в течение 10 минут при -20 ° C. После блокирования 10% ослиной сывороткой в ​​течение 1 часа слайды иммуноокрашивали первичными антителами против фибронектина (F3648), α -SMA (A2547; Sigma-Aldrich), коллагена типа 1 (234168; EMD Millipore), E-кадгерина. (3195; Cell Signaling Technology) и β -катенин (ab15180; Abcam, Inc.). Затем эти слайды окрашивали вторичным антителом, конъюгированным с Cy2– или Cy3 (Jackson ImmunoResearch Laboratories).Для демонстрации совместной локализации MMP-7 и β -катенина проводили двойное иммунофлуоресцентное окрашивание криосрезов почек и культивированных клеток HKC-8. Окрашенные слайды просматривали под микроскопом Nikon Eclipse E600 (Nikon) или конфокальным микроскопом Leica TCS-SL (Leica Microsystems, Buffalo Grove, IL).

Вестерн-блот-анализы

Экспрессию белка анализировали вестерн-блот-анализом, как описано ранее. ⁴¹ Использовались следующие первичные антитела: анти-MMP-7 (GTX11603; GeneTex), антиактивный β -катенин (05–665; EMD Millipore), анти– β -катенин (610154; BD Transduction Laboratories. , Сан-Хосе, Калифорния), анти-PAI-1 (sc-5297; Santa Cruz Biotechnology, Санта-Крус, Калифорния), anti-Snail1 (ab17732; Abcam, Inc.), антифибронектин (F3648), анти– α -SMA (A2547), антивиментин (V2258), анти– α -тубулин (T9026; Sigma-Aldrich), анти-E-кадгерин (3195; Cell Signaling Technology) , анти-LEF1 (2230; Cell Signaling Technology) и мышиный моноклональный антипан-специфический актин (MAB1501; EMD Millipore).

Коиммунопреципитация

Взаимодействие β -катенина с E-кадгерином или LEF1 в клетках HKC-8 определяли с помощью коиммунопреципитации, как описано ранее. ³⁰ Клеточные лизаты иммунопреципитировали в течение ночи при 4 ° C с антителом против E-кадгерина (610182; BD Transduction Laboratories), анти-LEF1 (2230; Cell Signaling Technology) и белком A / G плюс агарозой (sc-2003; Санта-Крус Биотехнология).Осажденные комплексы промывали буфером для лизиса и кипятили в течение 5 минут в буфере для образцов SDS с последующим иммуноблоттингом с анти- β -катенином (610154; BD Transduction Laboratories), анти-E-кадгерином (3195; Cell Signaling Technology) или антитело против LEF1 (2230; Cell Signaling Technology,) соответственно. Аликвоту клеточных лизатов также подвергали иммуноблоттингу с использованием антитела против α -тубулина (T9026; Sigma-Aldrich) для подтверждения того, что использованное количество клеточных белков (ввод) было равноценным.

Ядерное и цитоплазматическое фракционирование

Собирали

клеток HKC-8 и дважды промывали холодным PBS. Ядерный и цитоплазматический белок получали с использованием реагентов для ядерной и цитоплазматической экстракции NE-PER в соответствии с протоколами, указанными производителем (Thermo Fisher Scientific, Vernon Hills, IL). Ядерный белок нормализовали с помощью мышиных моноклональных антител к связывающему ТАТА белку (ab818; Abcam, Inc.).

ОТ-ПЦР в реальном времени

Выделение тотальной РНК и количественная ОТ-ПЦР в реальном времени выполнялись согласно процедурам, описанным ранее. ³⁰ Вкратце, синтез первой цепи кДНК осуществляли с использованием набора для системы обратной транскрипции в соответствии с инструкциями производителя (Promega, Madison, WI). ОТ-ПЦР в реальном времени выполняли на системе обнаружения последовательностей ABI PRISM 7000 (Applied Biosystems, Foster City, CA), как описано ранее. ³⁰ Реакционная смесь для ПЦР в объеме 25- мкл л содержала 12,5 мкл л 2 × SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), 5 мкл мкл разбавленного продукта обратной транскрипции (1:10) и 0.5 μ M набор смысловых и антисмысловых праймеров. Реакцию ПЦР проводили в стандартных условиях. После последовательных инкубаций при 50 ° C в течение 2 минут и 95 ° C в течение 10 минут протокол амплификации состоял из 40 циклов денатурации при 95 ° C в течение 15 секунд, отжига и удлинения при 60 ° C в течение 60 секунд. Стандартная кривая была построена для серийных разведений кДНК матрицы. Уровни мРНК различных генов рассчитывали после нормализации с помощью β -актина. Последовательности праймеров, используемые для амплификации, представлены в дополнительной таблице 3.

Трансфекция и анализ люциферазы

Влияние ММР-7 на транскрипцию гена, опосредованного β -катенином, оценивали с помощью репортерной плазмиды TOPFlash, содержащей два набора из трех копий сайта связывания Т-клеточного фактора в восходящем направлении от минимальный промотор тимидинкиназы (TK) и кДНК люциферазы (EMD Millipore). Клетки HKC-8 трансфицировали с использованием реагента Lipofectamine 2000 с плазмидой TOPFlash и инкубировали с рекомбинантным белком MMP-7 человека в отсутствие или в присутствии ICG-001, как указано.Некоторые клетки котрансфицировали экспрессионной плазмидой sKlotho (pV5-sKlotho). Плазмида внутреннего контроля (0,1 мкг, г) Renilla reniformis , люцифераза, управляемая промотором TK (pRL-TK; Promega), также была котрансфицирована для нормализации эффективности трансфекции. Анализ люциферазы выполняли с использованием набора для двойной системы анализа люциферазы в соответствии с протоколами производителя (Promega). Об относительной активности люциферазы (условные единицы) сообщали как кратную индукцию по сравнению с контролями после нормализации эффективности трансфекции.

Статистический анализ

Все изученные данные были выражены как средние значения ± стандартная ошибка среднего. Статистический анализ данных проводился с использованием программного обеспечения SigmaStat (Jandel Scientific, Сан-Рафаэль, Калифорния). Сравнение между группами проводилось с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом Ньюмана-Кеулса. Корреляционный анализ Спирмена (непараметрический) был использован для оценки взаимосвязи между ММП-7 в моче и другими переменными. P <0,05 считалось значимым.

Благодарности

Мы благодарим Центр биологической визуализации Университета Питтсбурга за использование их основных средств.

Эта работа была поддержана грантами Национальных институтов здравоохранения DK064005, DK0 и DK106049; Гранты Национального фонда естественных наук Китая 81130011 и 81521003; Грант Инновационной группы Научного фонда Гуандун 2014A030312014; и Исследовательский фонд Гуанчжоу 15020025. R.J.T. был поддержан грантом 13FTF169

Американской кардиологической ассоциации.

• Авторские права © 2017 Американского общества нефрологов

Каста будет играть ключевую роль в Андхра-Прадеше

На линиях фронта в южном прибрежном Андхра-Прадеше и в районе Райаласима, идущих на второй этап голосования в четверг, нарисованы линии фронта. основа касты.

В то время как каста не была основным фактором на первом этапе выборов в Телангане и северном побережье Андхры, второй этап будет совершенно другим. Выборы проводятся в штате как на 42 места в Лок Сабха, так и в Собрание штата, состоящее из 294 членов.

Вступление в партию Праджа Раджям (PRP) суперзвезды Чирандживи, которая принадлежит к сообществу Капу, изменило кастовые уравнения в штате, особенно в политически значимом южном прибрежном регионе.

Капу, отсталый класс со значительной численностью населения в прибрежной Андхре, ищут ключевую роль в политике государства, в которой долгое время доминировали высшие касты Каммас и Реддис.

Произошла кастовая поляризация. Капу, которые составляют самую большую общину, в которой проживает около 20 процентов от 78-миллионного населения штата, похоже, сплотились за Чирандживи.

Под лозунгом «социальной справедливости» суперзвезда пытается объединить Капу, другие отсталые классы (OBC), зарегистрированные касты, зарегистрированные племена и меньшинства, которые вместе составляют более 80 процентов населения.Однако актеру пока не удалось развить эту новую кастовую матрицу.

PRP, вероятно, преуспеет в округах, где есть большая часть голосов Капу, особенно в Восточном и Западном округах Годавари и Кришны. Он также будет сокращен в банках голосов правящего Конгресса в других округах в пользу телугу Desam Pary (TDP).

Капу были традиционным банком голосования Конгресса, и с их миграцией в PRP, Конгресс столкнулся с трудностями, несмотря на видимое отсутствие антигосударственных полномочий.

Именно из-за кастового фактора, а не обещания бесплатных цветных телевизоров и денежных пособий, TDP, кажется, имеет преимущество в восточных и западных районах Годавари, Кришна, Гунтур и Пракасм в южном прибрежном штате Андхра, которые посылают столько же как 88 законодателей в Собрание штата.

ПРП, которая, как полагают, плохо себя чувствовала в Телангане и северном побережье Андхры, пришла на избирательные участки 16 апреля и вряд ли окажет серьезное влияние в Райаласиме, сосредотачивается на этих районах.Он надеется получить значительное количество мест, чтобы выступить в роли производителя королей в случае зависания Ассамблеи.

Хотя Каммас и Реддис составляют около шести и 10 процентов населения штата, соответственно, они экономически и политически влиятельны. Большинство из 14 главных министров государства были представителями этих каст, и капу никогда не добивался высоких постов.

Чирандживи удалось привлечь несколько лидеров Капу из ТДП и Конгресса. Это давление со стороны сообщества вынудило нескольких высших лидеров, включая бывших министров, присоединиться к ПРП.

Тем не менее, по мнению политологов, ПРП не смогла стать основным претендентом на власть из-за своей неспособности увлечь за собой другие отсталые касты. Хотя партия выставила 104 кандидата из отсталых классов, что является самым высоким показателем среди всех партий в истории штата, ей не удалось сколотить альянс отсталых классов.

Капу, которые экономически и социально сильны среди отсталых классов, имеют несколько подкаст; они также имеют отличия от других отсталых классов.

Избирательный округ Палаколлу в Западном Годавари, откуда Чирандживи испытывает свои политические судьбы, является классическим примером. Между Kapus и OBC, такими как Setty Balijas и Devangulu (ткачи), есть серьезные различия, что усложняет жизнь актеру.

Для Ассамблеи, состоящей из 294 членов, Конгресс выставил 88 Reddys, четырехпартийный Большой Альянс во главе с TDP выставил 46 Kammas, в то время как PRP передала партийный билет 37 Kapus.

Голосование в 20 округах Лок Сабха и 150 избирательных округах в южных прибрежных районах Андхра и Райаласима будет проведено на втором этапе 23 апреля.

Запись легендарного актера Н.Т. Рама Рао вошел в политику штата в 1983 году, что сделало Каммаса главной силой в штате, в котором до того времени доминировал Реддис.

О том, даст ли политическое падение Чирандживи Капу больший кусок политического пирога и навсегда изменит кастовые уравнения, станет известно только после объявления результатов 16 мая.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
  браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.